重组类人胶原蛋白ⅱ膜的生物相容性

《重组类人胶原蛋白ⅱ膜的生物相容性》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、维普资讯http://www.cqvip.com西北大学学报(自然科学版)2007年1O月，第37卷第5期，Oct．，2007，Vo1．37，No．5JournalofNo~hwestUniversity(NaturalScienceEdition)重组类人胶原蛋白Ⅱ膜的生物相容性李荣，范代娣，朱晨辉，薛文娇，惠俊峰，段志广(1．西北大学生命科学学院；2．西北大学化工学院，陕西西安710069)摘要：目的探讨用戊二醛交联得到的重组类人胶原蛋白Ⅱ(recombinanthuman—likecollagenlI，RHLCⅡ)膜的生物相容性。方法用浓度为0．005mob'L和O．01mo

2、b'L的戊二醛分别交联RHLCⅡ得到两组RHLC11膜(0．005mob'L组和O．O1mob'L组)；把成纤维细胞接种到两组RHLC11膜上，用倒置显微镜和扫描电子显微镜观察细胞贴附情况；用M，IrI’法分析成纤维细胞在两组RHLCⅡ膜上的生长和增殖情况；通过细胞毒性实验评价两组RHLClI膜的细胞毒性。结果当成纤维细胞培养到6h时，均能贴附于两组RHLCⅡ膜上；培养到96h时，两组RHLCⅡ膜上的成纤维细胞均融合成片并形成多层细胞；经M，IrI’法分析，细胞接种后96h，成纤维细胞在两组RHLClI膜上均能实现增殖；O．01mob'L组比0．005mol／L组细胞毒性要大，但两

3、组在各时间段，毒性评定均在O～1级，细胞毒性实验合格。结论戊二醛浓度为0．005mol／L和O．01mol／L的RHLClI膜具有良好的生物相容性。关键词：重组类人胶原蛋白11；成纤维细胞；细胞贴附；细胞毒性中图分类号：R318．08文献标识码：A文章编号：1000．274X(2007)05-0771-05胶原蛋白具有低抗原性、生物可降解性和优越0．1％(体积分数)的戊二醛交联RHLC1I制成两种的生物相容性等优点¨J，并且还有利于细胞的贴附RHLClI膜。戊二醛是制作胶原蛋白相关生物材料和迁移，被广泛地制成生物材料而应用于人工皮时常用的一种化学交联剂，它可在较短时间内有肤领域。理

4、想的人工皮肤应该具备安全，不携带病效交联胶原，有良好的胶原稳定作用。采用戊二醛毒的特点J，但目前使用的胶原蛋白绝大多数来自可以增加材料的机械强度，但同时会使材料带有一于动物组织、皮肤提取物，容易携带病毒(猪瘟疫、定的毒性l7J。同时有研究表明，在组织移植中采用禽流感)、支原体、衣原体等有害污染源，生物安全低于0．O1mol／L的戊二醛进行交联，此浓度极低的性无法得到有效保障。本实验所采用的重组类人胶醛积累不会对组织造成额外损伤。研究这两种原蛋白II(recombinanthuman．1ikecollagenlI，RHLCRHLCⅡ膜的生物相容性，为RHLClI作为组织工程Ⅱ)是一种

5、利用基因工程技术将胶原蛋白的mRNA支架材料应用于人工皮肤领域做探索I生研究。逆转录成cDNA，经酶切修饰后重组于E．coliBL213．7内，经过高密度发酵、分离、纯化等工艺生产的1材料与方法水溶性高分子生物蛋白。它与动物体提取胶原蛋白相比具有安全性高、无病毒隐患等优点，生物医1．1材料学应用前景广泛H，在动物实验中表现出良好的生RHLClI由本实验室生产。成纤维细胞选用物相容性_5J。但是，将RHLClI制作成组织工程支2BS细胞，细胞毒性实验选用BHK．21细胞，均由第架材料，并对其生物相容性进行研究还未见报道。四军医大学基础医学部提供。培养基为RPMIMe．本实验采用浓度为

6、0．05％(体积分数)和dium1640购于Gibco公司，小牛血清购于上海赛达收稿日期：2007-01·16基金项目：国家科技重大攻关基金资助项目(2003DA901A32)；国家自然科学基金资助项目(20476085)作者简介：李荣(1981一)，女，山东烟台人，西北大学硕士生，从事应用微生物研究。维普资讯http://www.cqvip.com．———772．-——西北大学学报(自然科学版)第37卷公司，MTr(3一(4，5-dimethythiazol-2一y1)-2，5-diphenyl50％，100％浓度的材料浸提液，每孔加100L。当tetrazoliumbromid

7、e)和二甲亚砜(DMSO)购于Am—培养到2，4，7d时，采用MTI'法进行分析。以完全resco公司，戊二醛水溶液为国药集团化学试剂有限培养基为空白对照，计算细胞相对增殖率(relative公司产品。growthrate，RGR)=实验组吸光度值／空白组吸光度1．2方法值X100％，按照表1对材料毒性评分，计算平均值1．2．1RHLClI膜的制作将RHLClI冻干品溶于对材料毒性总体评级。无菌蒸馏水中，制成浓度为l5L的水溶液。再向表1细胞相对增殖率和细胞毒性分级该