鳖源胶原蛋白的提取工艺优化及结构表征

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1、江苏农业科学2013年第41卷第12期·-——265·-——田永通，沈欢欢，宋伟，等．鳖源胶原蛋白的提取工艺优化及结构表征[J]．江苏农业科学，2013，41(12)：265—269鳖源胶原蛋白的提取工艺优化及结构表征田永通，沈欢欢，宋伟，毛玉婷，周奕如，彭茜，李彩燕，钱国英(浙江万里学院生物与环境学院，浙江宁波315100)摘要：为了研究新型鳖源胶原蛋白的提取方法及结构特征，以中华鳖的裙边为提取材料，比较酸法、碱法和酶法的提取效果，通过单因素正交试验设计优化酶种类、酶解温度、酶用量、底物浓度和提取时间等主要参数，并

2、采用SDS—PAGE电泳、HPLC、紫外扫描等方法分析胶原蛋白的生化特征。结果表明，酶法提取中华鳖裙边胶原蛋白的效果最好，提取用酶为胃蛋白酶，最佳提取工艺为温度40℃，酶用量1mg／mL，底物浓度25％，提取时间20h，该优化条件下胶原蛋白的提取率高达75．23％，得到的胶原蛋白为I型胶原蛋白，其甘氨酸含量最高，且有特征吸收峰。关键词：中华鳖；裙边；胶原蛋白；提取优化；结构表征中图分类号：TS201．21文献标志码：A文章编号：1002—1302(2013)12—0265—05胶原蛋白(collagen)是生物体细胞

3、外基质的主要成分，约肉中脂肪酸含量丰富，鳖甲周围的结缔软组织通常被称为占胶原纤维固体物的85％，占动物体内蛋白质总量的25％～“裙边”，胶原蛋白含量十分丰富，超过60％，是最滋补的部30％，它广泛存在于动物的各种结缔组织中(如软骨、皮肤、分，具有极高的营养与美容价值。键、韧等)，对机体和脏器起着支持、保护、结合及形成界隔的本试验基于新型生物制品的研发及中华鳖的综合开发利作用⋯。胶原蛋白能补充机体氨基酸，使皮肤胶原蛋白活性用，探讨中华鳖裙边胶原蛋白的提取及工艺优化，采用单因素加强，保持角质层水分及纤维结构完整，促进皮肤

4、组织新陈代试验和正交试验设计比较酶种类、酶解温度、酶添加量、底物谢，增强循环，延缓衰老；与周围组织亲和性好，有独特的修复浓度、酶解时间对胶原蛋白提取率的影响，并分析了胶原蛋白功能；能通过螺旋结构将分子内氢键所结合的水分子紧锁内的生化特征，以期为中华鳖及其他龟鳖动物胶原多肽的开发部，有良好的保湿功效。由于胶原蛋白的特殊生理功能，提供科学依据。其应用日趋广泛。长期以来，人们都是使用猪、牛的皮和骨提1材料与方法取胶原蛋白和明胶，但口蹄疫、疯牛病、禽流感等疾病的暴发，使人们对畜牧胶原制品的安全性产生疑虑；另外，由于宗教和1．

5、1材料习俗等原因，有些地区不能使用牲畜胶原制品。因此，寻找胶1．1．1材料与试剂试验所用中华鳖购于宁波当地人工养原蛋白的新来源显得愈来愈迫切。目前人们普遍利用蛙殖场，体重约500g。先将中华鳖放血后致死，再将其裙边、肌皮、鱼皮、鱼鳞等水产动物原料提取胶原蛋白，而对于肉、皮肤等分离后装入密封袋，于一2O℃冷藏备用。胃蛋白本身就富含胶原蛋白的中华鳖原料研究甚少。酶(3000U／g)、胰蛋白酶(1000U／g)、木瓜蛋白酶中华鳖(Pelod~cussinensis)，别称水鱼、团鱼、鼋鱼、元鱼、(3500U／g)、醋酸一柠

6、檬酸缓冲液(pH值6．0)、氯胺T水溶老鳖、王八，自古就是我国传统的营养滋补佳品，具有很高的液、三一羟脯氨酸标准品购于生工生物工程(上海)股份有限营养价值和保健功效。现代医学已揭示了中华鳖对机体的抗公司。氢氧化钠、乙酸、盐酸、异丙醇、对二甲氨基苯甲醛等均氧化与增强免疫功效的机理，因而中华鳖在临床上已被推荐为分析纯。为增强机体免疫力的辅助食品，成为我国重要的名特优水产1．1．2主要仪器Eppendof5417R冷冻高速离心机、移液养殖品种之一。当前，鳖类的生理活性物质及抗癌药品、保健枪(德国艾本德股份公司)，EL204

7、电子分析天平(瑞士梅特食品的开发成为人们研究的热点。中华鳖作为食品，不但味勒一托利多公司)，DHG一9140电热恒温鼓风燥箱、道鲜美、高蛋白、低脂肪，而且含有多种维生素和微量元素，现DK一8D电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司)，代医学充分证实了其抗氧化与增强免疫的功效。中华鳖的肌FD一1A一50真空冷冻干燥机(北京博医康实验仪器有隈公司)，uV一1600紫外分光光度计(上海美谱达仪器有限公收稿日期：2013—05—28司)，核酸蛋白分析仪(美国赛默飞世尔科技有限公司)，基金项目：浙江省自然科学基金青年基金(编

8、号：LQ13C190001)；浙L一8900氨基酸分析仪(日立有限公司)。江省农业新品种选育重大专项(编号：2012C12907)；浙江省新苗1．2试验方法人才计划(编号：2012R419021)；浙江省宁波市自然科学基金(编1．2．1中华鳖裙边的前处理取出裙边解冻并剪碎，用号：201lA6100l7)；浙江省宁波市科技创新团队项目(编号：0．