表达人源ntcp的小鼠肝细胞限制hbv的生活史

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1、学校代码：10385分类号：研究生学号：1500215020密级：硕士学位论文表达人源NTCP的小鼠肝细胞限制HBV的生活史HBVlifecycleisrestrictedinmousehepatocytesexpressinghumanNTCP作者姓名：王宇泽指导教师：林毅教授学科：生物学研究方向：生物化学与分子生物学所在学院：化工学院论文提交日期：二〇一五年四月十日学位论文独创性声明本人声明兹呈交的学位论文是本人在导师指导下完成的研究成果。论文写作中不包含其他人已经发表或撰写过的研究内容，如参

2、考他人或集体的科研成果，均在论文中以明确的方式说明。本人依法享有和承担由此论文所产生的权利和责任。论文作者签名：签名日期：学位论文版权使用授权声明本人同意授权华侨大学有权保留并向国家机关或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权华侨大学可以将本学位论文的全部内容或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。论文作者签名：指导教师签名：签名日期：签名日期：摘要摘要近来的研究表明，人类钠离子牛簧胆酸共转运蛋白（NTCP或SLC10

3、A1）是乙型肝炎病毒（HBV）的一个功能性细胞膜受体。体外的过表达以及敲低实验都证明了NTCP能够介导HBV或者包裹了HBV外膜蛋白的丁型肝炎病毒（HDV）对人肝细胞的特异性侵染；这一功能也在其他一些物种的肝炎病毒及其对应的宿主细胞上得到验证。然而，NTCP是否能够介导HBV感染小鼠肝细胞的问题仍然没有答案。由于缺少可用的HBV敏感小鼠模型，HBV在预防和治疗等领域的研究均受到了极大地限制。因此，研究NTCP是否能够支持小鼠肝细胞对HBV感染具有敏感性具有重大的意义。本论文的数据揭示了小鼠NTCP

4、对HBV侵染支持性上的缺陷阻止了病毒在小鼠肝细胞中的感染；然而，尽管人NTCP能够支持包裹了HBV外膜蛋白的HDV在人与小鼠肝细胞系HepG2、AML-12、Huh7和Hepa1-6中的感染和增殖，只有外源表达人NTCP的人肝细胞系HepG2和AML-12具有对HBV的敏感性，而小鼠肝细胞Huh7、Hepa1-6以及原代肝细胞都不能单纯地通过表达人NTCP获得对HBV完整生活史的支持能力。由此推论，人NTCP能够支持HBV感染人肝细胞，却无法介导小鼠肝细胞对HBV的敏感性。后续的实验结果表明，HB

5、V无法感染小鼠肝细胞不仅因为小鼠NTCP无法介导病毒进入细胞膜，小鼠肝细胞在HBV进入细胞膜后同样不能支持病毒的扩增。通过外源导入的HBV基因组能够产生病毒的实验证明了小鼠肝细胞支持HBV基因组整合后的增殖步骤；而转入人肝细胞因子抑或是抑制细胞固有免疫都不能使小鼠肝细胞获得对HBV侵染的敏感性。由此，在小鼠肝细胞中仍然还有未知的HBV感染限制因素存在，只有鉴定和消除限制因素才有可能最终建立HBV敏感的小鼠模型。关键词：乙型肝炎病毒钠离子牛簧胆酸共转运蛋白小鼠肝细胞HBV敏感小鼠模型IAbstrac

6、tAbstractRecentstudieshaverevealedthathumansodiumtaurocholatecotransportingpolypeptide(SLC10A1orNTCP)isafunctionalcellularreceptorforhepatitisBvirus(HBV).However,whetherhumanNTCPcansupportHBVinfectioninmousehepatocytecelllineshasnotbeenclarified.Becau

7、seanHBV-permissiblemousemodelwouldbehelpfulforthestudyofHBVpathogenesis,itisnecessarytoinvestigatewhetherhumanNTCPsupportsthesusceptibilityofmousehepatocytecelllinestoHBV.TheresultsshowthatexogenoushumanNTCPexpressioncanrendernon-susceptibleHepG2(huma

8、n),Huh7(human),Hepa1–6(mouse),AML-12(mouse)celllinesandprimarymousehepatocyte(PMH)cellssusceptibletohepatitisDvirus(HDV)whichemploysHBVenvelopeproteins.However,humanNTCPcouldonlyintroduceHBVsusceptibilityinhuman-derivedHepG2andHuh7cells,butnot