红掌遗传转化体系与抗菌肽基因表达载体的构建

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1、SOOCHOWUNIVERSITY位论文纖论文题目红掌遗传转化体系与抗菌肽基因表达载体的构建研究生姓名牛瑞鹤指导教师姓名谈建中专业名称风景园林学苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明••所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：斗辟轉曰期：苏州大学学位

2、论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以釆用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年__月解密后适用本规定。非涉密论文k/论文作者签

3、名：斗4槔_日期：W夂‘(-V0导师签名：VkH日期：Xb�7^0红掌遗传转化体系与抗菌肽基因表达载体的构建中文摘要红掌（Anthuriumandraeanum）为天南星科花烛属多年生草本花卉，因其花叶形态奇特，花期持久，常作为切花材料；盆栽品种株型优美，是广泛应用于室内装饰的花卉。但是，红掌在栽培生产过程中，极易受到细菌性叶斑病的侵害，严重时造成毁灭性损失，这是国内外红掌生产上的一大障碍。因此，开展抗病基因工程研究、培育抗病品种具有重要理论意义及应用价值。本研究在前人研究的基础上，就红掌的再生体系、农杆菌介导的遗传

4、转化体系、抗菌肽基因及其修饰、融合基因及植物表达载体、农杆菌转化等方面进行了研究，取得了以下实验结果。1、优化了红掌的再生体系。以盆栽红掌品种SYN-A的愈伤组织为供试材料，以1/2MS培养基为基本培养基，探讨了不同生长素（2,4-D、NAA、IBA）、不同细胞分裂素（6-BA、TDZ）及其浓度配比对红掌愈伤组织不定芽分化的影响。在本试验条件下，红掌愈伤组织的不定芽分化率都达到了76.67%以上，其中最优培养基组合为1/2MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D0.1mg/L，愈伤组织的不定芽分化率可达100%，再分

5、化系数高达31.06，且不定芽生长良好。2、探明了红掌对三种抗生素的敏感性差异。试验结果表明，红掌外植体对潮霉素的敏感性高于卡那霉素，前者更适用于红掌转基因组织的筛选，其使用浓度以20mg/L为宜；其次，红掌外植体对头孢霉素的敏感度较低，在添加浓度为600mg/L、培养8周时，外植体依然能正常生长，试验时使用浓度500mg/L即可达到良好的抑菌效果。3、初步建立了农杆菌介导的红掌遗传转化体系。以红掌愈伤组织为受体材料，以农杆菌EHA105为供试菌种，通过正交试验方法，探讨了外植体预培养时间、农杆菌侵染时间、超声波处理

6、时间和共培养时间等对遗传转化的影响，其影响程度依次为共培养时间>预培养时间>侵染时间>超声时间。初步建立了适用于红掌的遗传转化体系：切取1cm×1cm×0.5cm大小的愈伤组织块、预培养3d，以OD600值为0.6的I菌液、侵染时间20min，侵染期间超声波处理20s，无需共培养，而后经抑菌培养、筛选培养，可获得抗性愈伤组织。4、构建了含抗菌肽融合基因的植物表达载体及工程农杆菌。应用生物信息学方法，以病程相关蛋白PR1a的信号肽与抗菌肽Shiva-1为基本序列，利用红掌偏爱密码子进行修饰优化后，合成了含特异酶切位点的

7、抗菌肽融合基因（命名为AaAMP），并连接入中间载体pCAMBIA1301，成功构建了植物表达载体pCAMBIA1301-AaAMP，进而转化农杆菌EHA105获得了工程菌株。关键词：红掌；抗菌肽基因；再生体系；遗传转化；农杆菌介导转化法作者：牛瑞鹤指导教师：谈建中IIConstructionofGeneticTransformationSystemandExpressionVectorwithAntibacterialPeptideGeneinAnthuriumandraeanumAbstractAnthurium

8、andraeanum,akindofperennialherbwhichbelongstoAnthuriumgenusofAraceaefamily,isgenerallyusedascuttingflowermaretialsbecauseofitspeculiarpatternsandthelongfloweringperiod.Potte