丹参cps基因表达载体构建及其对丹参遗传转化的研究

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1、长春中医药大学硕士学位论文丹参CPS基因表达载体构建及其对丹参遗传转化的研究姓名：胥彬申请学位级别：硕士专业：中药学指导教师：张辉;黄璐琦20090301长春中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名＿＿＿＿＿年月日关于学位论文成果归属权的声明本

2、人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下自选课题或导师承担的国家立项资助的计划课题的一部分，系本人在导师指导和资助下独立进行研究工作所取得的成果，归属权为长春中医药大学和本人导师所有。特此声明，本声明的一切法律责任由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解长春中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权长春中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印

3、或其他复印手段保存和汇编本学位论文。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日长春中医药大学2009届硕士毕业论文中文摘要中文摘要丹参（SalviamiltiorrhuzaBunge）为我国传统名贵中药材，具有活血化瘀，通经止痛的功效。丹参中主要含有脂溶性二萜类化合物和水溶性化合物，其中以丹参酮ⅡA为代表的二萜类化合物是治疗心脑血管系统疾病的重要药物。本文应用gateway克隆技术构建丹参CPS基因的过表达载体并通过农杆菌介导法，通过发根农杆菌得到丹参毛状根，根癌农杆菌得到丹参转基因株系和烟

4、草转基因株系，为进一步筛选高产株系打下基础，也为进一步研究CPS基因的功能提供了有利条件。根据本实验室获得的CPS基因cDNA和Gateway克隆技术的要求,设计含有attB接头的引物,将CPS基因两端加上attB序列，通过BP反应和LR反应后获得含有CPS基因的过表达载体。通过电击转化将构建好的载体pH7WG2D-CPS转入发根农杆菌ACCC10060和根癌农杆菌EH105。通过农杆菌介导法获得丹参毛状根、丹参转基因株系和烟草转基因株系。本实验通过PCR、酶切、测序确定载体pH7WG2D-CPS构建成功；通过农杆菌介导法得到丹参

5、CPS过表达的阳性毛状根和阳性植株；通过农杆菌介导法转化烟草得到烟草CPS基因过表达的阳性植株。通过上述研究，可以得出应用gateway技术构建载体操作简便、快速，转化率高。农杆菌转化法操作简单，并获得了转基因丹参的阳性毛状根且转化率较高达到70%以上，转基因的植株中所得阳性率较低，其不到10%。通过所得阳性材料为进一步研究丹参功能基因和高产株系打下了良好的基础。关键词：丹参CPS基因载体构建基因转化1长春中医药大学2009届硕士毕业论文英文摘要ABSTRACTSalviamiltiorrhuzaBungeisawell-know

6、nChineseherbalplant,anditsroots,knownasDansheninChinese,arewidelyusedintheclinicaltreatmentofmenstrualdisordersandbloodcirculationdiseasesetc.SalviamiltiorrhizaincludesLiposolublediterpenoidsandwater-solublecompound.DiterpenoidsespeciallyTanshinoneⅡAisakindofimportant

7、medicinecompoundwhichisusedtotreatcardiovascularandcerebrovasculardiseases.ApplicationgatewaycloningtechnologytobuildDanshenCPSgeneover-expressionvectorandbyAgrobacteriumrhizogenesDanshenbehairyrootsandbyAgrobacteriumtumefaciensDanshenandtobaccotransgeniclineswereobta

8、ined.Tofurtherlaythefoundationforscreeningofhigh-yieldingstrains，forstudyingfurtherfunctionofCPSgeneintheMetabolicpathway.Ac