构建tgf β1介导的角膜基质ecm纤维化体外三维培养模型的研究

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1、学号：２０户承虔种乂脅１２２０３８５ｘｅｄｉＧｕａｎｉｃａｌＵｎｖｅｒｓｉｔｇｉＭｙ硕±学位论文构建ＴＧＦｐ１介导的角膜基质ＥＣＭ纤维化体外Ｈ维培养模型的研究斬荷导师姓名：李霞专业名称：眼科学申请学位类型：学术型学位答辩委员会主席：刘金华答辩委员会委员：黎海平周炼何剑锋曾静二０—五年五月原创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师的指导下进行的研究工作及取得的成果。据我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方夕ｈ论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不

2、包含获一得广西医科大学或其他教育化构的学位或证书使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。＂：签字日期；学术论文作者签名化ＩＳ、Ｇ、３学术论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即；在校期间论文的知识产权属广西医科大学。学校有权保存论文的电子和纸质文档，可借阅或上网公布本论文的部分或全部内容，可、、，ＩＵ采用影印复印或其它手段保存汇编学位论文学校可Ｗ向国家有关机关或机构送交论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借

3、阅。同意广西医科大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。保密论文在解密后遵守此规定。学术论文作者签名：綱导师签字签字时期：年月３曰签字曰期：友年如曰＾ｗｌ＾６ｊ构建ＴＧＦｐｌ介导的角膜基质ＥＣＭ纤维化体外Ｈ维培养模型的研究２０１２级硕±毕处论文个人简历基本情况姓名：斬荷性别：女民族：汉族出身年月；１９８８年９月籍贯；河北省巧州市政治面貌；中国共产党员学习工作经历（从本科学历起）起止时间所在院校或单位学历学位职称－２０１２２００７．９．６

4、中南大学湘雅医学院临床医学学±学位无２０－１２．９至今广西医科大学眼科学硕±学位无研究生期间科研经历４－２０１７１２项目起止时间；２０１．１．ＴＧＦ－项目名称：Ｐ３对角膜基质体外Ｈ维培养模型中纤维化细胞外基质合成的影响项目来源：国家自然科学基金项目本人承担任务：构建ＴＧＦｐｉ介导的细胞外基质纤维化的体外Ｈ维培养模型，筛选出在模型中生长的角膜基质细胞向肌成纤维细胞诱导并合成纤维化细胞外基质的最佳培养ｅａ－条化及对相关产物进行民ｌｔｉｍｅＰＣＲ、ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ。检测，在

5、基因和蛋白水平上进行分析２构建ＴＧＦｉ介导的角膜基质ＥＣＭ纤维化体外Ｈ维培养横型的研究２０１２级硕±毕业论文ｐ目录中文摘要１英文摘要３刖胃５材料６、方法１５结ｍ论２４结２８参考文献２９附录３２综述３３参考文献４３致Ｗ４８攻读学位期间发表的学术论文４９３构建ＴＧＦＩ介导的角膜基商ＥＣＭ纤维化体外Ｓ维培养模型的研究２０１２级硕±毕並论文Ｐ构建ＴＧＦ目１介导的角膜基质ＥＣＭ纤维化体外王维培养模型的研究摘要背景：角膜

6、损伤修复过程中细胞外基质纤维化是角膜癒痕的形成基－础。转化生长因子ｉＴｒａｎｓ抗ｒｍｉｎｇＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒｉ，ＴＧＦｉｐ（ｐｐ巧樞角膜基质过度产生细胞外基质（ＥｘｔｒａｃｅＭａｒＭａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）。我们在前期研究工作中构建了角膜基质Ｈ维培养模型，现设想将ＴＧＦｐｉ添加于该Ｈ维培养体系中，达到构建角膜基质ＥＣＭ纤维化的体外Ｈ维培养模型。目的：构建角膜基质体外Ｈ维培养模型，评估ＴＧＦｐｉ对该Ｈ维培养模型中细胞外基质纤维化相关基因表达的影响，确定该Ｈ维培养体系是否可作为角膜基质纤维化细胞

7、外基质的体外Ｈ维培养候选模型。方法；分离牛角膜基质细胞，构建体外Ｈ维培养模型Ｐｅｌｌｅｔ，根据培养液成份不同分为３组；（１）对照组；基础培养液组（ＤＭＥＭ／Ｆ１２＋１０％２Ｔ１＋ＴＧＦ－胎牛血清），（）低浓度组：基础培养基Ｐ１（０．５ｎｇ／ｍｌ），（３）Ｔ１高浓度组－１Ｉ２ｗ：基础培养基＋ＴＧＦＰ（ｎｇ／ｍｌ）。培养时用巧黄绿素／破化丙巧法（ＣａｌｃｅｉｎＡＭ／ＰＩ）法进行细胞巧性测定；应用实时巧－ｔ光定量聚合酶链反应（民ｅａｌＴｉｍｅＰＣＲ）和蛋白印迹法（ＷｅｓｅｒｎＢｌｏｔ）８Ｉｗｔ－检测培养

8、４１１，，２ｗ的３组Ｐｅｌｌｅ的ａ平滑化肌动蛋白（ａＳｍｏｏ化ＭｕｓｃｌｅＡｃｔｉｎ，ａＳＭＡ）、Ｉ型胶原（ＣｏｌｌａｇｅｎＩ，ＣｏｌＩ）、ｍ型胶原（Ｃｏｌｌａｇｅｎｌｌｌ，Ｃｏｌ阻）等基因的表么并对结果进行统计