甘草转基因毛状根培养体系的建立与ifs基因功能验证

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1、^^/Iif^-fAGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI硕士学位（毕业）论文甘草转基因毛状根培养体系的建立与/ES基因功能验证学位申请人：罗婉娇指导教师：葛淑俊教授学科专业：遗传学学位类别：理学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇_五年五月三十日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河北农业大学或萁他教言和fel的幸位成证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的

2、任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名:签字R期:g年《月i円学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权过_北农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名:爲丞成签字日期：年月日签字日期：〃年{月3日学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话:通讯地址：邮编:分类号

3、：S567.71单位代码：10086密级：公开学号：2012182甘草转基因毛状根培养体系的建立与IFS基因功能验证InducementandCultureofTransgenicHairRootsandFunctionalAnalysisofIFSGeneinLicorice学位申请人：罗婉娇指导教师：葛淑俊教授学科专业：遗传学学位类别：理学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一五年五月三十日摘要甘草（GlycyrrhizauralensisFisch）是豆科甘草属多年生草本植物，以干燥的根及根茎入药，是我国常用的大宗药材，其中的黄酮类化

4、合物具有抗溃疡、抗癌、抗艾滋病毒、抗氧化等功效。本研究利用发根农杆菌介导技术将异黄酮合酶基因IFS转入甘草，通过对农杆菌菌株、外植体类型、侵染方式、诱导条件及培养基种类等的研究，建立甘草转基因毛状根诱导及培养体系，并进行IFS基因在黄酮类化合物代谢中的功能验证。主要研究结果如下：1、农杆菌菌系、外植体类型和侵染方式对甘草毛状根诱导有较大影响。在供试的四种发根农杆菌菌系A4、1025、K599和Aqua1中，只有Aqua1能够诱导甘草形成转基因毛状根，转化率为46%。综合转化率及单个外植体诱导形成的毛状根数来看，以子叶节为外植体，采用侵染法诱导，

5、效果最好，转化率为34%。2、光照有利于毛状根的诱导和生长。在光照条件下，毛状根生长健壮，玻璃化率及褐化率低于黑暗条件，仅为8.3%和4.2%。3、毛状根在不同培养基中生长状态不同。在铵盐浓度较低的B5和1/2MS中毛状根生长状态良好，分支数量多，成活率高，分别为66.7%、53.3%；在无机盐浓度较高的MS、MSB5和SH培养基内生长细弱，易褐化或愈伤化死亡。活性炭可有效抑制毛状根的褐化和愈伤化。4、HPLC分析表明IFS基因超表达毛状根中有2种异黄酮含量显著增加，比对照分别提高1.7和1.9倍。实时定量PCR结果显示，该基因在5个转基因根系

6、中表达量均显著提高。本研究部分揭示了甘草苷和甘草素作为异黄酮合酶的底物在甘草中累积的原因。为解决甘草资源匮乏、进一步优化甘草品质奠定了一定的基础。确定了甘草转基因毛状根诱导及培养体系，为今后利用毛状根系统研究甘草复杂的代谢机制及其相关基因的表达调控提供技术支持。关键词：甘草；发根农杆菌；毛状根；异黄酮合酶InducementandCultureofTransgenicHairRootsandFunctionalAnalysisofIFSGeneinLicoriceAuthor:LuoWanjiaoMajor:GeneticsAdvisor:Pr

7、ofessorGeShujunAbstractGlycyrrhizauralensisFischisaplantofleguminousGlycyrrhizashrubbyherb,whosedriedrootandrhizomeareusedasmedicine.IthasbeenawidelyusedtraditionaldrugsforalonghistoryinChina.Itcontainsflavonoidswhichhasaneffectonanti-ulcer,anticancer,anti-HIV,anti-oxidant.I

8、nthispaper,thegenetictransformationandculturalsystemofLicoricehairrootsinte