决明毛状根诱导培养体系优化及成分的分析

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1、西南大学硕士学位论文决明毛状根诱导培养体系优化及成分分析姓名：李素红申请学位级别：硕士专业：药用植物栽培指导教师：李关荣20120521摘要决明毛状根诱导培养体系优化及成分分析药用植物栽培专业硕士研究生李素红指导教师李关荣教授摘要由于自然种植条件的限制，传统的中药种植技术对中药的产量和质量都有很大的影响。而在人为控制的条件下，可以在无激素培养基上培养大量生长快、遗传稳定的毛状根，毛状根中富含与原植物相当甚至更高含量的次生代谢产物。本论文通过研究不同的外植体及外植体龄，不同的预处理时间、共培养时间、除茵方法，不同的抗生素种类及浓度等对决明毛状根诱导和生长的影响，从而确定决明毛状根诱导培养的最适

2、条件；并比较分析上述方法得到的毛状根和无菌实生根及决明子中的葸醌、蛋白质、氨基酸、粗脂肪、脂肪酸、糖类及矿质元素的差异，为决明毛状根的批量培养体系的建立和优化提供理论指导。用于毛状根培养的培养基为MS基本培养基，基本的培养流程为：筛选饱满的种子_获取无菌苗一取外植体进行预培养_活化发根农杆菌一发根农杆菌浸染外植体_共培养_毛状根的诱导与除菌_毛状根无菌培养生长。比较决明毛状根、实生根及决明子中化学成分的方法：用混合碱液法测定葸醌含量；考马斯亮蓝法测定可溶性蛋白；日立L_8800型全自动氨基酸分析仪测定游离及水解氨基酸；SZF．06A粗脂肪测定仪测定租脂肪含量；气相色谱仪(岛津GC2100)测

3、定脂肪酸；3，5．二硝基水杨酸法测定还原糖和总糖，蒽酮法测定可溶性糖；TA5．990型原子吸收分光光度计测定矿质元素。通过以上试验，得到以下结论：(1)培养决明毛状根的最适条件将籽粒饱满的决明子用浓硫酸浸泡10分钟，无菌处理后置于MS培养基中，在25℃，16h光照(1800Lx)，8h黑暗条件下培养，7天后，在决明无菌幼苗上取子叶形态学的下半部作为外植体，在浓度为OD600=o．5的菌液中浸湿后立刻取出，共培养2．3d，然后用添加了100mg／L羧苄青霉素的MS培养基进行除菌，此时决明毛状根的诱导率最高，且后续生长最好。(2)决明毛状根、实生根及决明予中的化学成分差异西南大学硕士学位论文-m

4、一,．————II——IIIIII——一以干重计，决明毛状根中结合葸醌和游离葸醌含量(0．112％，0．119％)低于实生根(O．187％，0．232％)及决明子(0．286％，0．629％)；可溶性蛋白含量为130．38m∥g均高于实生根(40．96rag／g)和决明子(18．60rag／g)：水解和游离氨基酸含量(23．562g／lOOg．4878．800mg／lOOg)均高于实生根(14．212g／lOOg，940．959mg／lOOg)和决明子(15。216g／1009’240．514mg／lOOg)，三种材料中的水解必需氨基酸含量分别为4．362g／loog、5．019g／lOOg

5、和5．616g／lOOg，相差不大，但毛状根中的游离必须氨基酸含量(422．928mg／lOOg)，显著高于实生根(250．429mg／lOOg)和决明子(158．248mg／lOOg)：毛状根中粗脂肪含量(1．91％)低于实生根(2．32％)和决明子(15．69％)；不饱和脂肪酸(70％)低于实生根(75．4％)和决明子(75．7哟；总糖、还原糖和可溶性糖含量分别为635．19mg／g、58．88mg／g和39．92mg／g，均显著低于实生根(755．25mg／g、84．46mg／g、75．17mg／g)，但比决明子稍高(619．32mg／g、45．53mg／g、34．76mg／g)，差异

6、不显著；矿质元素在三种材料中均以Mg的含量为最高，分别为999．68、772．34、1221．563I．tg／g；毛状根中Mg和Ca含量高于实生根，但低于决明子。毛状根中Fe、Mn、Zn的含量显著高于实生根和决明子，Ql含量与实生根相当，但低于决明子。关键词：钝叶决明；毛状根；诱导培养；条件优化；成分分析ⅡABSTRACTTheOptimizationfortheInductionandGrowthofHairyRootofCassiaobtusifoliaLandAnalysisofItsChemicalComponentsMaster’Sdegreecandidate：Su—HongLi

7、Supervisor：Guan-RongLi，ProfessorSpeialty：CultivationofMedicinalPlantsDirection：PhysiologyandBiochemistryofMedicinalPlantsDuetothelimitationsofnaturalcultivationconditions，theplantingtechniquesofthetradition