凤仙花毛状根培养体系的建立及其槲皮素含量的测定

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1、分类号：R282.2单位代码：10193密级：公开学号：2012167硕士学位论文凤仙花毛状根培养体系的建立及其槲皮素含量的测定EstablishmentofCultureSystemofImpatiensbalsaminaL.HairyRootsandDeterminationofthequercetin作者姓名：程义婷学位类别：医学硕士专业名称：中药学研究方向：中药生物技术指导教师：杨世海教授所在学院：中药材学院2015年5月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以

2、标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文

3、的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日导师签名：签字日期：年月日摘要凤仙花(ImpatiensbalsaminaL.)原产于中国、印度和马来西亚，是一年生草本植物，俗称急性子、指甲花；

4、其全草、种子(急性子)、茎(透骨草)、是我国民间一直作为一种观赏、入药两相宜的草本植物与传统中药。本实验中，凤仙花植物的种子在无菌条件下培养获得无菌苗，利用发根农杆菌(Agrobacteriumrhizogenes)R15834、R1000、A4、R1诱导不同外植体产生毛状根，摸索了凤仙花毛状根诱导条件与方法，建立了茎段与根段外植体诱导的毛状根的培养体系，毛状根体系的增殖优化，PCR检测诱导毛状根的基因介导，并对毛状根中的槲皮素含量进行初步研究。对茎段，根段诱导的毛状根槲皮素含量，添加诱导子的毛状根中的槲皮素含量，与凤仙花种子中槲皮素含量

5、进行比较。本实验得出的主要结论如下：1.凤仙花毛状根体系建立的最佳条件是，0.2%升汞对凤仙花种子消毒5min，在MS0固体培养上培养10d天的无菌苗。用R15834、R1000、A4、R1四种菌分别对叶，茎，根3部分外植体进行浸染，A4诱导出的毛状根诱导率最高，茎段和根段诱导的毛状根主根粗壮、乳白色绒毛多，且平均诱导率分别达到92%；79.33%。最佳外植体为茎段与根段。且预培养24h，共培养48h，菌种对茎段浸染8min，根段浸染6min，A4的菌液浓度对茎段OD600为0.6，根段为OD600为0.8时，培养基pH值为6.0，凤仙花

6、毛状根增值速度最快。2.PCR检测结果已经证实，A4菌株中T-DNA的遗传基因已转移到凤仙花3部位外植体，叶片，茎段，根段诱导的毛状根基因组中。3.毛状根优质体系的筛选与增殖优化，1/2MS液体培养基更适合茎段及根段诱导的毛状根生长。茎段，根段分别在28d，21d凤仙花茎段与根段毛状根的鲜重均较接入时增加了9.53倍。且茎段与根段有效成分槲皮素的积累在28d，21d时最大。而碳源浓度为30g·L-1时，蔗糖为碳源的1/2MS培养基毛状根增殖倍数最高，长势最好。同时茎段，根段诱导的毛状根分别增加了9.23，9.85倍。添加蔗糖的培养基最适合

7、凤仙花毛状根的生长。4.用HPLC法对凤仙花毛状根中槲皮素的含量测定，其中凤仙花种子中凤仙花槲皮素质量分数为0.292%，凤仙花茎段诱导的毛状根中槲皮素质量分数为0.537%，凤仙花根段诱导的毛状根中槲皮素质量分数为1.22%，含量高于茎段毛状根及种子中的槲皮素。凤仙花茎段及根段毛状根中的槲皮素含量凤仙花种皮中的含量的1.84倍和4.20倍。根段诱导的毛状根的槲皮素含量是茎段的2.27倍。5.添加水杨酸诱导的毛状根，HPLC法测定的质量分数是2.75%，含量是凤仙花种子的9.43倍，是未添加诱导子的根段诱导的毛状根的2.25倍。关键词：凤

8、仙花，发根农杆菌，毛状根，优质体系，槲皮素AbstractImpatiensbalsaminaL,a.k.a.knownasImpatientisSemenandhenna,isanannua