hplc法测定扶桑花中槲皮素的含量

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1、HPLC法测定扶桑花中槲皮素的含量【摘要】目的建立扶桑花中槲皮素的含量测定方法。方法采用HPLC法，色谱柱为DikmaplatisilODS柱(250mm×4.6mm,5μm)，流动相为甲醇0.5%磷酸水溶液(体积比30∶70)，流速1.0mL·min-1，柱温30℃，检测波长360nm。结果槲皮素进样量在0.0416～0.416μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为98.95%，RSD为1.09%(n=6)。结论该方法操作简便、快速、准确，可用于扶桑花药材的质量控制。【关键词】扶桑花;槲皮素;高效液相色谱法　Abstract:ObjectiveTodevelopameth

2、odforthedeterminationofquercetininFlosHibisciRosaesinensis.MethodsHPLCedusingaDikmaplatisilODScolumn(250mm×4.6mm,5μm)ethanol0.5%phosphoricacidsolution(30∶70)asmobilephaseunderafloL·min-1.Thecolumntemperature.ResultsThecalibrationcurveofquercEinethodisconvenient,reproducibleandaccurate,andcanbe

3、usedinqualitycontrolofFlosH.Rosaesinensis.　　KeyaplatisilODS色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇0.5%磷酸水溶液(体积比30∶70)，流速1.0mL·min-1，检测波长360nm，柱温30℃，进样量20μL。理论板数按槲皮素计算大于5000，分离度大于1.5。色谱图见图1。　　2.2溶液的制备　　2.2.1对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成104μg·mL-1的溶液，即得。　　2.2.2供试品溶液的制备将扶桑花药材阴干，粉碎，过3号筛，取粉末约1g，精密称定，加甲醇50mL，加热回流1

4、h，滤过，滤液蒸干，残渣加20%盐酸15mL溶解，加热回流1h，迅速冷却，用石油醚萃取3次，每次15mL，合并水相，蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至25mL，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。　　图1对照品(A)和供试品(B)的高效液相色谱图　　Figure1HPLCchromatogramsofstandard(A)andsample(B)2.3线性关系考察分别精密吸取标准品溶液0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取20μL，按“2.1”项下条件进样。以峰面积为纵坐标(Y)，进样量(μg)为横坐标(X)绘制标

5、准曲线，得回归方程：Y=40969X-1090.3，r=0.9998。结果表明，槲皮素进样量在0.0416～0.416μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。　　2.4精密度试验精密吸取对照品溶液20μL，连续进样5次，结果槲皮素峰面积的RSD为0.86%，表明仪器的精密度良好。　　2.5稳定性试验精密吸取供试品溶液20μL，分别于0、2、4、6、8、12h进样分析。结果槲皮素峰面积的RSD为1.58%，表明供试品溶液在12h内稳定性良好。　　2.6重复性试验精密称取同一批样品，按“2.2.2”项下方法平行制备供试品溶液5份，测定槲皮素含量，求得RSD为1.29%，重复性良好。　　2.7加

6、样回收率试验取扶桑花粉末约0.25g，精密称定，分别加入一定量的槲皮素对照品，按“2.2.2”项下方法处理并测定槲皮素含量，平均回收率为98.95%，RSD为1.09%，见表2。　　2.8样品测定取不同批次的样品，按“2.2.2”项下方法提取槲皮素，精密吸取供试品溶液20μL，注入高效液相色谱仪，记录槲皮素的峰面积，采用外标法计算含量。结果见表3。表2加样回收率试验结果表3扶桑花中槲皮素的含量测定(n=3)　　3讨论　　3.1本实验曾考察了不同质量分数(10%、20%、30%)的盐酸，在不同温度(80、90、100℃)下，水解不同的时间(0.5、1、1.5h)的效果，结果表明用20%的

7、盐酸，于90℃水解1h，所得槲皮素提取率最高。　　3.2色谱条件考察了甲醇水、甲醇0.1%磷酸水溶液、甲醇0.5%磷酸水溶液等流动相的分离效果，发现流动相中加入磷酸可提高分离度，改善峰形、避免拖尾，以甲醇0.5%磷酸水溶液为流动相时分离效果最好。　　3.3本文建立的HPLC测定扶桑花槲皮素含量的方法具有简便、高效、重复性高等特点，可用于扶桑花药材的质量控制。【参考