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1、HPLC法测定鹿蹄草中槲皮素的含量作者：张文,黎钰铃,封丽彬,范卫锋【摘要】目的建立HPLC法测定鹿蹄草中槲皮素含量的方法。方法采用HPLC法,色谱柱：AgilentEclipseXDB-C18柱(4.6mm×150mm,5μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸(50∶50)；检测波长：370nm。结果槲皮素在0.092～0.46μg范围内线性关系良好,平均回收率为99.24%,RSD＝0.70%。结论方法简便、准确、灵敏度高、重复性好,能有效测定鹿蹄草药材中槲皮素含量。【关键词】鹿蹄草；槲皮素；高效液相色谱法；含量测定Abstract：ObjectiveTosetupame
2、thodfordeterminingthequercetininPyrolacalliathaH.Andres.MethodHPLCmethodwascarriedonAgilentEclipseXDB-C18column(4.6mm×150mm,5μm)withmobilephaseofmethanol-0.1%phosphoricacid(50∶50),andthedetectingwavelengthwasat370nm.ResultThestandardcurvewaslinearwithintherangeof0.092～0.46μg.Theaveragerec
3、overyratewas99.24%andRSDwas0.70%.ConclusionThemethodissimple,accurate,highlysensitiveandreproducible.ItcanbeusedforthequalitydeterminationofquercetininPyrolacalliathaH.Andres.Keywords：PyrolacalliathaH.Andres；quercetin；HPLC；contentdetermination鹿蹄草为鹿蹄草科植物鹿蹄草PyrolacalliathaH.Andres的干燥全草,习称鹿衔
4、草,收载于2005年版《中华人民共和国药典》(一部)。其性温、味甘苦,具有祛风湿、强筋骨、止血之功效,用于风湿痹痛、腰膝无力、月经过多、久咳劳嗽[1]。现代药理研究表明,该药具有明显的抗菌、抗炎、促进免疫、改善冠心病症状等作用[2]。其主要含有鹿蹄草素、槲皮素等成分。本试验采用HPLC法测定鹿蹄草中槲皮素的含量。 1仪器与试药Agilent1200系列高效液相色谱仪(包括四元泵,自动进样器,脱气机,紫外可见检测器,柱温箱)。鹿蹄草(广西玉林制药有限责任公司提供,由广西玉林制药有限责任公司蒙毅高级工程师鉴定)；槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号100081-2
5、00406,含量测定用,纯度在98%以上)。水为重蒸馏水,甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯。 2方法与结果3 2.1色谱条件色谱柱为AgilentEclipseXDB-C18(4.6mm×150mm,5μm)；流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(50∶50)；流速：1.0mL/min；检测波长：370nm；柱温：30℃；进样量：10μL。色谱图见图1。 2.2对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量,加甲醇制成每1mL含槲皮素46μg的溶液,作为对照品溶液。 2.3供试品溶液的制备取鹿蹄草粉末适量,取0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇-10%盐酸(3∶1
6、)的混合溶液50mL,称定重量,回流1h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,滤液用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液作为供试品溶液。 2.4线性关系考察分别精密吸取槲皮素对照品溶液(46μg/mL)2、4、6、8、10mL,置于10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,各进样10μL,连续进样2次,测定峰面积。以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程：Y＝5.3287×102X－0.2009,r＝0.9999,在0.092～0.46μg范围内呈良好的线性关系。 2.5精密度试验取槲皮素对照品溶液,各重复进样6次,测定
7、峰面积,结果槲皮素峰面积RSD＝0.58%。 2.6重复性试验取同一批的样品6份,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,测定鹿蹄草中槲皮素含量,结果RSD＝0.82%。 2.7稳定性试验取同一供试品溶液,分别于配制后0、4、8、12h依法测定峰面积,结果RSD＝0.56%,表明样品溶液在12h内基本稳定。 2.8加样回收率试验 取已知槲皮素含量的鹿蹄草粉末,取约0.53g,分别精密称定,平行称取6份,各加入一定量的槲皮素对照品,制备成供试品溶液,在所确定的色谱条件下进行测定。结果槲皮素平均加样回收率为99.24%,RSD
