松江鲈（trachidermus fasciatus）肾细胞系的建立及生物学特性分析

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1、分类号密级UDC编号硕士学位论文松江鲈（Trachidermusfasciatus）肾细胞系的建立及生物学特性分析单莉娟(1211003)指导教师姓名李霞教授专业名称海洋生物学论文答辩日期2015年6月2日学位授予日期2015年6月2日MASTERALDISSERTATIONEstablishmentandcharactetizatonofkidneycelllinesfromroughskinsculpin(Trachidermusfasciatus)Supervisor:ProfessorLiXiaMasterCandidate:ShanLijuanCollegeofFisheriesan

2、dLifeScience,DalianOceanUniversityDalian,P.R.ChinaJune2015摘要摘要本文研究了松江鲈(Trachidermusfasciatus)肾组织细胞系的建立过程，并分析了细胞生物学特性。结果表明组织块培养法适用于松江鲈肾的原代培养；在25℃、5%CO2培养箱中，原代培养启动24h后有细胞贴壁牢固，36h后有细胞迁出，30d后长满单层；主要为成纤维样细胞；采用胰酶消化法进行传代，传代细胞生长与分裂状态良好，20代后松江鲈肾5-6d便可长成单层，原代培养和早期培养时，培养液的成分是添加5ng/mL人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、20µg/mL硫

3、酸软骨素、40ng/mLI型胰岛素样生长因子(IGF-I)的20%胎牛血清的DMEM/F12培养基；35代后，所有培养液为20%FBS-DMEM/F12。目前，松江鲈肾组织细胞已传至55代，成功建立松江鲈肾组织细胞系。经实验测定松江鲈肾组织细胞的群体倍增时间为别为56.32h，35代松江鲈肾组织细胞的核型分析结果是2n=40；核型公式为：14m+10sm+16t。病毒敏感性实验表明松江鲈肾组织细胞对鱼类诺达6.53病毒不敏感，对鲤春病毒血症病毒敏感，测定病毒滴度为10TCID50/mL。松江鲈肾组织细胞在不同血清浓度(0%、5%、10%、15%、20%)、不同浓度硫酸软骨素(0、10、20、3

4、0、40μg/mL)、不同浓度人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)（0、2.5、5、7.5、10ng/mL）以及不同浓度I型胰岛素样生长因子(IGF-I)（0、10、20、30ng/mL）条件下的生长特性研究结果表明：松江鲈肾组织细胞生长最适血清浓度为15%。最适硫酸软骨素的浓度为20μg/mL。最适IGF-Ⅰ的浓度为20ng/mL。最适bFGF的浓度为7.5ng/mL。本实验初步探索了草甘膦对松江鲈肾组织细胞的毒性效应，测定草甘膦对松江鲈肾组织细胞的24h半数抑制浓度为1177.66mg/L。微核实验表明：松江鲈肾组织细胞测试结果与对照组差异极显著。关键词：松江鲈；细胞系；生物学特性；敏感性

5、IAbstractAbstractThispaperdescribedtheestablishmentofkidneycelllinefromroughskinsculpin(Trachidermusfasciatus)andresearchthebiologicalcharacterization.Theresultsshowedthattheexplantmethodwassuitabletothistissue.Theresultsshowedthatthekidneycellsmigratedfromtheirtissuesafterculturedinvitrofor36h.Thek

6、idneycellsinprimaryculturewereallinfibroblasticmorphologyandproliferatedtoconfluencewithin30d.Allthecellsweresubculturedbytrypsindigestionmethod.Theygrewatasteadyrateduringsubsequentsubcultures.Afterpassage20,kidneycellscouldbesubculturedafter5-6d.Kidneycellshavebeensubcultureduptopassage55.Continuo

7、usroughskinsculpinkidneycelllinehavebeensuccessfullyestablished.Thedoublingtimewere56.32hinkidneycellsatthe35thpassage.Roughskinsculpinhadadiploidchromosomenumberof40anditskaryotypeformulawas2n=40=14m