乙型肝炎病毒逆转录酶区rti233v变异的演变及病毒学特点分析

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1、分类号:R512.62学校代码:10601密级:公开编号:Y12002097硕士学位论文乙型肝炎病毒逆转录酶区rtI233V变异的演变及病毒学特点分析学科专业:内科学（传染病）研究方向:病毒性肝炎的基础与临床研究研究生姓名:叶晓玲学号:Y12002097学位类型:科学学位导师:唐振祥教授指导老师:程书权教授徐东平教授刘妍副教授二O一五年六月独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加１＾标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注；如没有其化需要特剔声明的，本栏

2、可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作＾了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期；牟＾月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解桂林医学院有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权桂林医学院可将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国学术期刊（光盘版）电子杂志社、中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国优秀博硕±学

3、位论文全文数据库》、《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）戸学位论文作者機；导臟字：？日签字日期签字日期：许知ｙ：＞／＞年日目录乙型肝炎病毒逆转录酶区rtI233V变异的演变及病毒学特点分析…1中文摘要………………………………………………………………1ABSTRACT……………………………………………………………3英汉缩略词对照表……………………………………………………………6前言……………………………………………………………………………..8正文…………………………………………………………

4、…………………..91对象与方法…………………………………………………………..91.1研究对象………………………………………………………………91.2实验主要仪器………………………………………………………91.3主要试剂…………………………………………………………….…91.4实验方法……………………………………………………………….101.5HBVDNA巢式PCR扩增……………………………………………111.6PCR扩增产物的检测…………………………………………………131.7HBVDNA的克隆及测序分析…………………………………………131.8定点突变…………………………

5、……………………………………..181.9pTriEx-HBV(C)1.1倍重组载体的构建及鉴定………………………201.10转染级质粒的提取及浓度的测定……………………………………241.11分板、转染…………………………………………………………….261.12重组载体质粒转染HepG2细胞并加药培养…………………………281.13统计学处理……………………………………………..………………282结果…………………………………………………………………292.1临床样本资料和rtI233V变异检出分析……………………….292.2例典型CHB患者PCR扩增产物…………………..

6、……………292.3扩增产物HBVRT区TA克隆测序及其基因型分析…………………302.4定点突变结果………………………………………………………332.5重组载体质粒酶切鉴定及测序鉴定………………………………342.6各变异病毒株复制力水平及其表型耐药特点分析……………………353讨论…………………………………………………………………394结论…………………………………………………………………43参考文献………………………………………………………………45攻读学位期间发表的学术论文目录…………………………………………67致谢………………………………………………………………………

7、……68乙型肝炎病毒逆转录酶区rtI233V变异的演变及病毒学特点分析中文摘要目的分析乙肝病毒（hepatitisBvirus,HBV）逆转录酶区rtI233V变异的演变规律及其与阿德福韦酯（ADV）耐药的相关性。方法分析了9830例慢性HBV感染者血清样本中HBVrtI233V变异的检出率。选择其中2例代表性患者的动态收集血清样本，扩增HBVRT基因并克隆测序（>20个克隆/样本）以观察rtI233V变异的演变过程。构建pTriEx-HBV1.1倍野生株（WT）、3种临床变异株（rtI23