阿勒泰大尾羊fabp4、adipoq和cfd基因分子克隆及其组织差异性表达的研究

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1、分类号:密级：公开学号：201340S005单位代码：10759石河子大学碛士#像讼式阿勒泰大尾羊ylD/POg和CM)基因分子克隆及其组织差异性表达的研究学位申请人许瑞霞指导教师石国庆研究员甘尚权研究员中请学位类别专业硕士专业名称农业推广硕士研究领域养殖所在学院动物科技学院中国*新疆•石河子2015年06月分类号：密级：公开学号：2013408005单位代码：10759石河子大学硕士学位论文阿勒泰大尾羊FABP4、ADIPOQ和CFD基因分子克隆及其组织差异性表达的研究学位申请人许瑞霞指导教师石国庆研究员甘尚权研究员申请学位类别专业硕士专业名称农业推广硕士研究领域养殖所在学院动物

2、科技学院中国·新疆·石河子2015年06月CloninganddifferentlyexpressionofFABP4,ADIPOQandCFDgenesofAltaysheepADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricultureByXurui-xia(AnimalGenetics,BreedingandReproduction)DissertationSupervisor:Researcher.ShiGuo-qi

3、ngResearcher.GanShang-quanJune,2015摘要目的：阿勒泰羊是一种脂臀型绵羊品种，其独特的尾脂在维持机体正常的新陈代谢和体温过程中扮演了重要的角色，主要通过尾部脂肪沉积与代谢消长规律来适应恶劣的环境以维持机体正常的新陈代谢和体温，是研究绵羊尾脂沉积与代谢机制的理想模型。近年来的研究表明，FABP4、ADIPOQ和CFD基因参与葡萄糖和脂肪酸代谢以及脂肪细胞分化等生理过程，初步推测其与脂肪沉积代谢密切相关。本文以阿勒泰羊为研究对象，探讨了FABP4、ADIPOQ、CFD基因对阿勒泰羊尾脂沉积与代谢的影响。方法：1、阿勒泰羊饥饿与非饥饿模型的构建。模拟阿勒泰

4、羊在自然生理状态下尾脂沉积与代谢两种极端状态，即在夏秋季节牧草丰茂时脂肪沉积、春冬季节牧草匮乏时尾脂分解代谢的方式，对阿勒泰羊进行了饥饿试验，构建了阿勒泰羊饥饿与非饥饿状态下尾脂沉积与代谢的动物模型。2、以阿勒泰羊尾脂组织cDNA为模板，通过RT-PCR方法克隆获得FABP4、ADIPOQ和CFD基因完整的CDS区序列。3、以阿勒泰羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、肠系膜脂肪、尾脂等主要组织cDNA为模板，采用半定量RT-PCR方法获得FABP4、ADIPOQ和CFD基因在阿勒泰羊不同组织中的表达谱。4、应用实时荧光定量PCR技术检测了FABP4、ADIPOQ和CFD基因在阿勒

5、泰羊饥饿与非饥饿模型尾脂组织中的表达变化情况。结果：1、通过2周逐步限饲和4周完全禁食（期间自由饮水）后，饥饿模型阿勒泰羊精神上表现出焦躁不安、采食欲望强烈；其臀尾表现出“瘪瘦”表型，臀尾部皮肤松弛、软塌，臀部尾脂体积减小了1/3以上；体重显著下降；尾脂脂肪细胞体积变小，呈扁平的梭形。2、克隆得到绵羊FABP4、ADIPOQ和CFD基因完整的CDS序列，分别编码132、239、261个氨基酸。绵羊FABP4核苷酸序列及氨基酸序列与山羊、牛、牦牛、马鹿等反刍动物对应序列的同源性均高达90%以上；绵羊ADIPOQ基因的核苷酸序列与牛、小鼠、大鼠、野猪、人等对应序列的同源性在75%以上，

6、其中与牛对应序列的同源性高达85%以上；绵羊CFD基因核苷酸序列及其编码的氨基酸序列与反刍动物牛的同源性均高达96.9%以上。3、半定量RT-PCR检测结果表明，FABP4基因在阿勒泰羊心脏、肺脏、肌肉、肠系膜脂肪、尾脂组织中均有表达，但在肠系膜脂肪和尾脂中高丰度表达；ADIPOQ基因在尾脂组织中特异性高表达；CFD基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肌肉、尾脂中均表达，但在尾脂中高丰度表达。4、实时荧光定量PCR结果表明，阿勒泰羊FABP4基因在非饥饿组尾脂中的表达量略高于饥饿组尾脂，但二者差异不显著（P>0.05）；ADIPOQ、CFD基因则结果相反，阿勒泰羊ADIPOQ和CFD基因

7、在饥饿组尾脂中的表达量显著高于在饥饿组尾脂中的表达（P<0.01）。结论：上述结果表明，FABP4、ADIPOQ、CFD基因在阿勒泰羊尾脂沉积与代谢过程中具有一定的调控作用，可以作为哺乳动物脂肪组织发育调控过程中重要的候选功能基因。关键词：阿勒泰羊，饥饿与非饥饿模型，尾脂沉积与代谢IAbstractObject:Altaysheepisafat-tailsheepbreed,itsuniquefat-tailplaysanimportantroleinmaintain