krüppel样因子4在栉孔扇贝（chlamys farreri）早期发育和性腺年周期发育中的表达特征

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1、？ＯＣＥＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＣＨＩＮＡ硕ｉ学位论文ＭＡＳＴＥＲＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ样因子４在巧孔扇贝ｎ＊（ＣＡ／口巧戸知ｅｒ／）早期发育和性腺年周期论文巧目：发育中的表达特征Ｅｘｒｅ－ｐｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆＫｒｉｉｐｐｅｌｌｉｋｅｆａｃｔｏｒ４ｉｎ，Ｃ片心／甲ｒｅ＂ｄｕｒｉｎｅａｒｌｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔａｎｄ抑ｇｙｐ英文胚目：ｇｏｎａｄａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ作者：杨丹丹指导教师：张志

2、峰教授学位类别：全日制专业学位专业名称：生物工程研巧方向：谨兴此论文献给我的导师、我的家人和实验室的兄弟姐妹们杨丹丹‘样因子４在巧孔扇贝（ＣＡ／口抑Ｔｗ）早期发育和性腺年周期发育中的表达特征＾化主Ｉ方学位论文答辩日期：７／指导教师签字：Ｉ＼答辩委员会成员签字；繼京耗独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己巧发表

3、或撰写过的研究成果，也不包含未获得（＝注如没有其他需要特别声明的，本栏巧空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料＇。与我同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。？学位论文作者签名：；签字曰期；万年ｉ月曰２：＾身＾ｙｊｙ学位论文版巧使用授权书、本学位论文作者完全了解学校有关保留使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘。，允许论文被査阅和借阅本人授枚学校可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用影印、

4、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息研巧所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供倍息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名；导导导师签字；每谷杨ｊ＾〇■月日签字日期年月签字日期：＞／ｊ：年Ｊｒ义日勺＾Ａ＞卿？ｅ／样因子４在巧孔扇贝（ＣＴｚ／口ｗ戶為ＴＴ加）早期发育和性腺年周期发育中的表达特征摘要－ＫＬＦ一ＫＬＦ４属Ｔ（Ｋｒｉｉｐｐｅｌ样因子）家族，是真核生物中的类基础调控因子。脊椎动物的ＫＬ

5、Ｆ４在调控细胞增殖与分化、胚胎发育、诱导产生多能干细胞和肿癌发生等方面发挥重要作用。在海洋无脊椎动物中仅有个别物种表达水平－的研巧报道，这在定程度上制约了对该基因的系统认识和潜在的应用。＇本文＾＾重要的双壳类海洋经济物种巧孔扇贝（ＣＴｉ／ｗｗｙｓ知／ｒｅｎ）作为研巧对象，通过ＲＡＣＥ技术克隆获得了巧片基因的ｃＤＮＡ全长序列；采用半定量－ＲＴ－ＰＣＲ和定量ＲＴＰＣＲ技术确定了其在巧化扇贝成体各组织和性腺年周期发育－ＰＣＲ和整体原位杂交技术揭示了Ｗ过程中的表达特征；采用实时巧光定量ＲＴＪ乃

6、ｍＲＮＡ在巧孔扇贝早期发育过程中的表达图式。研究结果为深入探讨该基因在扇贝中的作用提供基础数据。主要结果如下：巧孔扇贝／：矿／ｃＤＮＡ全长共２，２８９ｂｐ，其中开放阅读框ＯＲＦ长１，００５ｂｐ，编码３３４个氨基酸，其预测的氨基酸具有ＫＬＦ家族保守的３个串联的巧指结构蛋白特有的转录激活域、转录抑制域、核定位信号等结构域。ＲＴ－ＰＣＲ结果显示巧孔扇贝ＡｍＲＮＡ在生长期半定量：矿／巧孔扇贝各成体组织中广泛表达，在闭壳肌、皆脏及外套膜中高水平表达，在精巢、巧巢、肝膜腺－ＰＣＲ结果远示中次之

7、。ＲＴ，ｍＲＮＡ在精巢中的表，在巧中的表达呈景低ｑ巧冷一，达水平显著髙于同发育时期的巧巢；在精巣中其表达量随着精子发生过程逐渐升商，成巧期精巢的份／４ｍＲＮＡ水平是生长期的３倍，而其在巧巢中的表达量在巧个发育周期中未见湿著性变化；仿／４ｍＲＮＡ在性腺中的表达呈现性别二态性的特点４在精子发生过程中具有重要作用。，推巧乂／／－ＰＣ民结果显示定量ＲＴ：巧孔扇贝巧污ｍＲＮＡ在各期胚胎中未见明显的表达，至担轮幼虫呈现巧水平表达，并在Ｄ形幼虫中维持髙水平表达，但至壳项幼虫时表达量显著降低。暗示巧斜作

8、为合子基因参与巧孔扇贝幼虫发育过程。整体原位杂交结果显示，巧种ｍＲＮＡ在进入幼虫期前，几乎没有可见的阳性信号出现。在担轮幼虫中，阳性信号主要集中在壳腺原基细胞周围巧曰凹附近的Ｉ‘－／Ｄ形《［域，：：在幼１］＾中信＾（坚皆中化肠道及后闭壳肌的片域；壳顶幼虫倍＾；．的强度减弱，信ｉ：嬰么肠迫附化推测巧基因参与ｒ巧化扇Ｗ幼虫的器