mapk在雌核发育二倍体鲫鲤性腺发育中的表达分析

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1、硕士学位论文MAPK在雌核发育二倍体鲫鲤性腺发育中的表达分析学科专业细胞生物学学位类型科学学位□专业学位研究生姓名王姿力导师姓名、职称肖亚梅教授论文编号湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一五年五月湖南师范大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的＾研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中１乂明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：ｉ笔

2、Ａ年ｂ月曰＾湖南师范大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属湖南师范大学。同意学校保留并向酉家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权湖南师范大学可臥将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｌ义采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。作者签違：Ｊ黎女曰期：如衣年ｔ月曰３导师签省：曰期：年＆月日馬隹ｆ分类号Q26密级学校代码10542学号201202141205MA

3、PK在雌核发育二倍体鲫鲤性腺发育中的表达分析ExpressionofMAPKinthegynogeneticdiploidscruciancarp研究生姓名王姿力指导教师姓名、职称肖亚梅教授学科专业细胞生物学研究方向细胞信号转导湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一五年五月摘要丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activatedproteinkinases,MAPK)信号途径在真核细胞基因表达、细胞增殖、分化、凋亡、新陈代谢等生理病理过程中发挥着重要的作用。通过远缘杂交、雌核发育操作技术已经成功研制出不同倍性经济鱼类，其中雌核发育二倍体鲫鲤具有产生

4、二倍体卵子的现象。不减数配子的形成可能与生殖细胞的核内复制或生殖细胞的细胞融合有关。本实验以雌核发育二倍体鲫鲤为材料，研究MAPK家族的主要成员ERK和JNK在雌核发育二倍体鲫鲤性腺中的表达分析，为进一步解析雌核发育二倍体鲫鲤不减数配子发生中的分子调控机制奠定基础。具体研究内容如下：（1）根据已知物种斑马鱼erk1基因的cDNA序列，克隆了红鲫、三倍体湘云鲫、异源四倍体鲫鲤和雌核发育二倍体鲫鲤中erk1基因的编码区中间片段序列，测序得到709bp的中间段序列，其中雌核发育二倍体鲫鲤与二倍体红鲫、三倍体湘云鲫，异源四倍体鲫鲤和斑马鱼erk1基因编码区中

5、间片段的相似性分别为99.7%、99.7%、96.3%、91.9%。（2）运用Western-blot技术检测JNK、p-JNK、ERK在雌核发育二倍体鲫鲤和不同倍性鱼性腺组织中表达分析。结果显示，JNK、ERK在鱼类性腺组织中均有较高量的表达，但在鱼类卵巢和精巢间、雌核发育二倍体鲫鲤和不同倍性鱼的性腺组织间，JNK或ERK的表I达量并不存在明显的差异。值得关注的是，P-JNK在雌核发育二倍体鲫鲤性腺中的表达量远高于三倍体和四倍体鲫鲤的卵巢组织。（3）对雌核发育二倍体鲫鲤早期性腺的组织学观察表明，6~10月龄雌核发育二倍体鲫鲤的性腺处于I期卵巢发育阶

6、段。8~10月龄的雌核发育二倍体鲫鲤的性腺中均可观察到性原细胞旺盛的分裂。运用Western-blot技术检测JNK、ERK在雌核发育二倍体鲫鲤早期性腺发育的表达。结果显示10月龄雌核发育二倍体鲫鲤性腺中JNK表达水平较6、8月龄的要高。ERK在6、8、10月龄的雌核发育二倍体鲫鲤性腺的表达成下调趋势。（4）采用免疫组织化学检测了ERK和JNK在雌核发育二倍体鲫鲤早期性腺组织中的表达。结果显示JNK和ERK在雌核发育二倍体鲫鲤早期性腺中有阳性表达。其中JNK在10月龄雌核发育二倍体鲫鲤性腺中的阳性反应强度高于6、8月龄。而ERK在8月龄和10月龄的性

7、腺中的阳性反应则弱于6月龄。这与Western-blot技术检测结果相一致。综上所述，本研究探讨了MAPK信号传导通路，尤其是JNK、ERK在雌核发育二倍体鲫鲤性腺中的功能，结果表明MAPK通路可能对雌核发育二倍体鲫鲤产生不减数配子具有重要调控作用。关键词：雌核发育二倍体鲫鲤;不减数配子;JNK;ERKIIABSTRACTMitogen-activatedproteinkinases(MARK)signalingpathwayplaysanimportantroleingeneexpression,proliferation,differentiat

8、ion,apoptosis,metabolismandotherphysiologicalprocessof