黄鳝性腺发育过程中差异表达基因的筛选

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1、中山大学理学硕士学位论文黄鳝性腺发育过程中差异表达基因的筛选Screeningofdifferentiallyexpressedgenesinthericefieldeel(Monopterusa／bus)gonadsatdifferentstages硕士生：导师：专业：杨柳张为民教授水生生物学答辩委员会(签名)答辩主席：龠，取农中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室中国广州_二零零七年五月黄鳝性腺发育过程中差异表达基因的筛选专业：水生生物学硕士生：杨柳导师：张为民教授摘要黄鳝(Monopterusalbus)卵巢的石蜡切片表明：卵黄

2、发生晚期(GSI为16．7％)的卵巢与处于卵黄发生中期(GSI为3．7％左右)的卵巢在结构上有明显的差别，并且在卵黄发生晚期的卵巢中有较为明显的雄性组织。应用抑制性差减杂交(SuppressionSubtractionHybridization,SSH)技术构建了这两个时期性腺抑制性差减文库．从中随机挑取1200个克隆进行了PCR和斑点杂交筛选，得到140差异表达的eDNA片段。挑选了95个eDNA克隆测序，测序结果经GenBank检索和生物信息学比较分析，其中∞个片段与已知的序列有较高同源性，另外有15个片段与NCBI数据库中没有明显同源性的基因。在正向文库

3、(Fs)我出一系列呼吸链上的相关基因的片段，包括NADH脱氢酶(NADHdehydrogenase)subunit1和4，细胞色素b(eytochromeb，Cytb)，细胞色素e氧化酶(cytochromecoxidase)subunit1、2和3；ATP合成酶(ATPase)subunit6，此外还找到载脂蛋白E(apolipoproteinE,ApoE)基因片段，soluteC越TiCrfamily44,member3基因片段；在反向库(Its)找到与虹鳟(Oncorhynchusmyldss)C型甘露糖结合凝集素(mannose-bindinglect

4、in,MBL)有较高同源性的基因。我们还建立了这两个时期卵巢的SMARTeDNA文库及其cDNA差减文库。从中随机挑取了1000个克隆，进行了PCR和斑点杂交筛选，得到∞个差异表达的cDNA片段，挑选了50个eDNA克隆测序，测序结果经GenBank检索和生物信息学比较，发现其中13个片段与报道的基因有较高的同源性．在正向(SFs)除了找到的上述呼吸链上的相关基因NADH脱氢酶subunit1外，还发现PR／SETdomaincontainingprotein8a基因，hydmxyl-delta-5·steroiddehydrogenase,3beta-and

5、steroiddelta-isomerase7基因，VHSV-inducedprotein基因，short．chainDehydrogcnasc／reductase(SDIlfamilylmember7基因以及BMSl一like，ribosomeassemblyprotein基因片段。在反向(SRs)中，找到Dab2protein，TSC22domainfamily，eggenvelopeglycoprotein，BTB(POz)domaincontaining8，isoformCRAc，以及zonadhesin基因片段。另外，还发现一些片段与原核生物基因有较

6、低的同源性，有25个片段与GenBank中序列无明显的同源性。应用半定量RT-PCR初步分析了上面所获得的黄鳝CoxI和ApoE基因在不同性腺发育阶段的表达，结果表明：在GSI>5％的卵巢中表达明显升高，这与抑制性差减杂交结果一致。关键词：黄鳝，卵巢，抑制性差减杂交，克隆，斑点杂交IIScreeningofdifferentiallyexpressedgenesinthericefieldeel(Monopterusalbus)gonadsatdifferentstagesMajor．-HydrobiologyName：liuYangSupervisor：Pr

7、o．WeiminZhangAbstractOvarianhistologyofficcfieldoeJ(Monopterusalbus)showedobviousdifferencesbetweentheovaryatmiddlephaseofvitellogenesis(GSI3．7％)andtheovaryatlatephaseofvitellogenesis(GSI16．7％)，andsomemaletissueswcl'efoundintheovaryatthelatterphase．Theovariesatthesetwophaseswere：use

8、dtoconstructthesupp