hdac1-sirna干扰质粒对膀胱癌rt112细胞凋亡的影响

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1、HDAC1-siRNA干扰质粒对膀胱癌RT112细胞凋亡的影响InfluenceoncellapoptosisbysiRNAinducedsilencingofHDAC1geneinbladdercancerRT112cells作者姓名：王琼专业：生物化学与分子生物学研究方向：基因克隆、诊断与表达指导教师：张家颖教授培养单位：基础医学院答辩日期：2015年5月前言膀胱癌是人类泌尿系统发病率和复发率均较高的肿瘤，其发病率也在近十几年间逐年上升，不同种族、不同性别、不同年龄的患者比例亦有区别，虽然与其他肿瘤如胃癌、肺癌、宫颈癌等相比发病率较低，但在泌尿系统中发病率比较高。其

2、发病原因尚不清楚，吸烟、暴露接触到化学性致癌物、有与膀胱癌有关的基因突变的家族史、慢性膀胱感染、砒霜、马兜铃等都是膀胱癌发生的危险因素。通过对人膀胱移行细胞癌（TCC）的全基因组测序，发现其表观遗传学也发生了突变，其中包括组蛋白乙酰化状态的改变[1]。组蛋白乙酰化是一种可逆的动态平衡状态，其在基因的转录后修饰中发挥功能。组蛋白乙酰化转移酶（HATs）与组蛋白去乙酰化酶（HDACs）两大类酶系共同参与调节这个过程。有研究发现，抑制HDAC可以在诱导膀胱癌在内的多种类型的癌症细胞生长阻滞中发挥重要作用，但是由HDAC介导的凋亡机制还不能完全阐明[2]。而HDAC抑制剂可抑制

3、HDAC家族的多种酶活性，而不能说明具体是由某个或某些HDAC家族成员中对其产生影响，而HDAC又是通过哪些通路促进细胞凋亡，这些都需要我们去探讨。根据文献，HDAC抑制剂可上调PTEN蛋白水平的表达协同其它药物促进肿瘤细胞的凋亡[3]。又有文献报道，野生型转录因子Sp1抑制PTEN的表达从而促进癌症的转移和浸润。而这种抑制作用是由HDAC1与PTEN的启动子结合实现的[4]。PTEN基因是一种具有蛋白酪氨酸磷酸酯酶活性的易突变的抑癌基因，其野生型可通过降低多个信号通路的关键因子的磷酸化水平发挥功能。PTEN表达的减少可通过PIP3磷酸酶的活性激活PI3K/ATK信号通

4、路的促肿瘤生长的作用。抑制该通路可降低对线粒体凋亡途径的阻滞作用，从而促进肿瘤细胞凋亡。本实验以人膀胱癌细胞系RT112细胞为实验对象，以构建HDAC1-siRNA重组质粒和HDAC抑制剂SAHA分别在体外条件下作用于RT112细胞，应用Real-timePCR、Westernblot和FCM检测对膀胱癌细胞HDAC1的干扰效果，对PTEN、Bcl-2家族中Bax和Bcl-2的表达水平以及细胞凋亡的影响。实验结果说明HDAC1-siRNA重组质粒可以抑制HDAC1基因的表达，上调PTEN的表达，下调Bcl-2表达，提示HDAC1可能通过抑癌基因PTEN的上调对肿瘤细胞的

5、凋亡产生促进作用。Ⅰ中文摘要目的：观察组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）siRNA对膀胱癌RT112细胞HDAC1基因、PTEN基因及凋亡相关基因Bax、Bcl-2的影响和对其凋亡影响，并对其可能机制进行初步的讨论。方法：体外培养人类膀胱癌RT112细胞，实验分4组，空白对照、HDAC1-control组、HDAC1-siRNA组和SAHA处理组。设计了2条HDAC1-siRNA序列和1条无关序列，构建HDAC1-siRNA重组质粒，分别转染RT112细胞，选取转染效率最高的HDAC1-siRNA-2序列进行后面的实验。流式细胞术检测各组细胞凋亡率变化，四组处理的细胞分别

6、提取mRNA和蛋白质，采用Real-timePCR技术检测HDAC1、Bax、Bcl-2基因mRNA水平，采用Westernblot技术检测HDAC1、PTEN、Bax、Bcl-2蛋白的表达水平。结果：（1）与对照组相比，HDAC1-siRNA和SAHA组在mRNA水平上，HDAC1表达下降，Bcl-2下调，Bax没有显著差异；在蛋白水平上，HDAC1下调，Bcl-2下调，PTEN上调，Bax没有显著差异；（2）流式细胞术分析HDAC1-siRNA和SAHA在不同程度上促进RT112细胞凋亡。结论：1、构建的HDAC1-siRNA重组质粒可以在体外干扰RT112细胞HD

7、AC1mRNA和蛋白的表达。2、HDAC1-siRNA重组质粒可以诱导RT112细胞的凋亡，可能与上调组蛋白乙酰化的水平，促抑癌基因PTEN表达和下调Bcl-2/Bax的比值有关。关键词：HDAC1-siRNA，PTEN，SAHA，膀胱癌，细胞凋亡ⅡAbstractObjective:Toobservetheeffectofsilencingofhistonedeacetylases1(HDAC1)bysiRNAontheapoptosisinbladdercancerRT112cells，anditspossiblemechanismi