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1、siRNAILK对人膀胱癌细胞凋亡的影响高娟1)*自然科学基金面上项目(No:81071719);重庆市科委自然科学基金(CSTC,2009BB5273)*联系人:Tel:029-84277794;E-mail:gaojuanmeic@163.comSupportedbytheGeneralProgramofNationalNaturalScienceFoundationofChina(81071719)andNaturalScienceFoundationofChongqingscienceandtechnologycommission(CS
2、TC,2009BB5273)*CorrespondingauthorTel:029-84277794;E-mail:gaojuanmeic@163.com,康炜1),陈俊霞2),朱军2),潘湘阳2)(1)陕西省西安市西安医学院附属医院检验科西安710077;2)重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016)[摘要]目的:探讨应用整合素连接激酶(ILK)特异性siRNA沉默ILK基因的表达对人膀胱癌细胞凋亡的影响。方法:将构建好的针对ILK基因的1个特异性siRNA表达质粒和1个无同源性的阴性对照质粒,在
3、脂质体介导下稳定转染人膀胱癌BIU-87细胞,并分别命名为BIU-87siILK,BIU-87vector及BIU-87细胞,运用Tunel凋亡检测试剂盒和流式细胞术检测BIU-87细胞的凋亡,进一步运用WesternBlot检测siRNAILK对凋亡相关蛋白Caspase3,Bax和Bcl-2的影响。结果:Tunel检测结果显示,BIU-87siILK组出现大量凋亡细胞,而BIU-87和BIU-87vector组仅有少量凋亡细胞出现。流式细胞仪检测结果显示,BIU-87siILK细胞大约有75.7±2%的凋亡细胞,而BIU-87vector组
4、和BIU-87组仅有0.88±0.1%和1.66±0.9%的凋亡细胞,WesternBlot结果显示,在BIU-87siILK组中,Bcl-2的表达明显降低,而Bax和Caspase3的表达明显升高。结论:siRNAILK可能通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax及Caspase3的表达诱导膀胱癌BIU-87细胞凋亡的发生。[关键词]整合素连接激酶;膀胱癌;凋亡[中图法分类号]R394.2EffectsOfSiRNAILKOnApoptosisInHumanBladderCancerBIU-87CellsGaoJuan1)*,KangWei1)
5、,ChenJunxia2),ZhuJun2),PanXiangyang2)1)DepartmentofLaboratoryofAffiliatedHospitalofXi'anMedicalCollege,Xi'an,China;2)CellBiologyandGeneticsDivision,MoleculeMedicalandTumerResearchCenter,ChongqingMedical,University,Chongqing,China)AbstractPurposeToinvestigatetheeffectsofsiRNA
6、ILKonapoptosisofhumanbladdercancerBIU-87cells.MethodstwosiRNAvectorsspecifictoILKgeneandonenon-homologousnegativecontrolvectorweredesignedandconstructed,thenstablytransfectedintobladdercancerBIU-87cellsviaLipofectamine2000,andwerenamedBIU-87siILKandBIU-87vector;cellapoptosis
7、wasassessedbyTunelKitandFlowCytometry;TheexpressionlevelofCaspase3,BaxandBcl-2wereassessedbyWesternBlot.ResultsThenumberofTUNEL-positivecellssignificantlyincreasedintheBIU-87siILKcells,comparedwithBIU-87cellsandBIU-87vectorcells;Flowcytometryassayshownthatabout75.70%±2%ofcou
8、ntedcellsbecameapoptoticinBIU-87siILKcellsgroup,however,aboutonly0.88%±0.1%