沙眼衣原体porf5质粒蛋白对hela细胞自噬与凋亡的影响

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3、的影响论文作者签名：：指导教师签名１论文评阅人；陈丽丽教授硕导南华大学公共卫生学院评阅人２；曾該华教授硕导南华大学医学院答辩委员会主席：让蔚清教授硕导南华大学公共卫生学院１委员：万艳平教授硕导南华大学医学院委员２；张艳教授硕导南华大学医学院委员３：伍和平副教授南华大学医学院委员４：邓仲良副教授硕导南华大学公共卫生学院答辩日期：２０１５年５月２４日南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的。研究成果尽我所知，除了论文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写

4、过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。？＾作者签名：＾＾年Ｊ月曰＾＾南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读（博／硕）±学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得Ｗ其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，目Ｐ：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阀和借阅可Ｗ公布学位论文的全部；学校或部分内容，可Ｗ采用复印、缩印或其它手段保

5、留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部口规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕±学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕±学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。乂作者签名；月日导师签名：３月＾日沙眼衣原体ｐ〇ＲＦ５质粒蛋白对ＨｅＬａ细胞自隨与调ｔ：的影响隨和调亡是决定细胞命运的重要因素摘要目的，参与各种疾病的病：自理和生理过程。尽管随着研究的不断深入对自晚与调亡的调控机制已经取得了重

6、要进展，但关于沙眼衣原体引起的自睡和调亡的具体调控机制尚未清楚。本研究Ｆ一试图探讨沙眼衣原体质粒蛋白ｐＯＲ５对ＨｅＬａ细胞自瞻和调亡的影响，为进步阐明沙眼衣原体的致病机制提供实验依据。°方法；将ｐＤＳＲｅｄＣｌ／ｐＯＲＦ５重组菌接种在ＬＢ固体培养基上，３７Ｃ恒温°？培养箱中培养口１化，挑取单个菌落，转种于ＬＢ液体培养基中，３７Ｃ恒温振荡培养４ｈ；按照ＯＭＥＧＡ质粒提取试剂盒说明书提取ｐＤＳ民ｅｄＣｌ／ｐＯＲＦ５重组质粒含ＭｅＩ、￡ｃｏＲＩ酶切位点的ＲＦ５特异性引物扩增ＯＲＦ５基因，再分别；用ｐＯｐ－双酶切ＰＣＲ扩増产物和慢病毒表达载体ＤＣＰ－－：Ｅ

7、（ＣＤＨＣＭＶＭＣＳＥＦ－１ＣＯＰＧＦＰ）；酶切产物纯化后进行连接，并转化感受态细胞ＤＨ５ａ，然后进行菌落ＰＣ艮、双酶切及测序鉴定：高纯度无内毒素抽提慢病毒表达重组质粒后，与辅助质粒共转染巧３Ｔ细胞，转染后化更换培养基，继续培养４８ｈ，收集富含，上清浓缩后得到高滴度的慢病毒颗粒慢病毒颗粒的细胞上清液，采用倍比稀释法检测病毒滴度；慢病毒感染ＨｅＬａ细胞，巧光显微镜下观察感染情况；流式分－－选获得稳定转