维生素a对hela细胞凋亡的影响

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1、山东医药2010年第50卷第1期维生素A对Hela细胞凋亡的影响薛延军。邵世和h。李先茜。段秀杰’(1江苏大学基础医学与医学技术学院，江苏镇江212013；2上海市普陀区中心医院；3江苏大学附属医院)摘要：目的研究维生素A对Hela细胞凋亡的影响。方法应用光学显微镜、电子显微镜观察维生素A对Hela细胞凋亡形态的影响；分别应用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳法及流式细胞仪分析维生素A诱导Hela细胞凋亡的生物化学特征、细胞特征及凋亡细胞百分率。结果光学显微镜下可见凋亡小体；电子显微镜下可见细胞固缩，核膜扭曲，

2、核染色体聚集成块并靠近核膜等凋亡细胞特征；在琼脂糖凝胶电泳中由于细胞DNA被降解而呈现典型的“阶梯状”图谱；流式细胞仪检测结果显示二倍体核型的特征，在DNA直方图上，G。峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型；维生素A诱导Hela细胞凋亡具有时间依赖性。结论维生素A可诱导Hela细胞凋亡。关键词：维生素A；Hela细胞；细胞凋亡中图分类号：R737．33文献标志码：B文章编号：1002-266X(2010)01-0034-02维生素A为一种脂溶性维生素，具有调节和控于含3块盖片的培养皿中，37℃，5％CO孵箱

3、中培制多种正常组织和上皮细胞增殖分化等多种生物学养，于对数生长期时加人维生素A，使维生素A终浓活性，特别是与肿瘤的发生、发展密切相关。本课题度为8g／ml，同时设对照组(不加维生素A组)，每组前期发现维生素A对Hela细胞有抑制作用，且以个组3个平行片。37℃，5％CO孵箱中继续培养8g／ml作用最佳，并将此浓度作为后面各项研究48h取出盖片，37oCPBS洗2次，醋酸甲醇固定3Omin，加瑞氏染液染1min后，用姬姆萨染液与磷酸的实验浓度。2008年3—11月，本文从细胞凋亡角缓冲液1：9混合染10

4、min，流水冲洗干净，晾干，二度探讨了维生素A抑制Hela细胞生长的作用机理。甲苯透明，光学树脂封片，在光学显微镜下观察细胞1材料与方法形态。收集经8I．~／ml维生素A处理48h的HeLa1．1材料维生素A由美国Sigma公司提供；细胞，PBS洗两次，加3％戊二醛固定3h，PBS洗2RNase、蛋白酶K、RPMI．1640、胎牛血清、NP-40等购次，锇酸固定，树脂包埋、染色、上镜观察并照像。自Gibco公司；Hela细胞系(人宫颈癌细胞系)由中1．2．3细胞DNA提取及电泳观察Hela细胞凋亡国医

5、学科学院中国协和医科大学基础所细胞生物室的生物化学特征收集经8g／Illl维生素A处理提供。显微镜摄影系统BH2(日本Olympas)；倒置48h的Hela细胞离心l000r／min5min，用含2显微镜(日本CK一32PHOlympas)；水平电泳系统(北retool／LEDTA的PBS洗2次，加0．3mlTBE(45京)；电子显微镜JEM-2000(美国EXI)；流式细胞测mmol／LTris—Hcl，pH8．7，1mmol／LEDTA)，0．25％定仪I~ectonDickinsonFACS42

6、0(美国)。NP-40及RNase(终浓度l0g／L)混匀，37℃40min。1．2方法加蛋白酶K(1mg／m1)37qC40min，取上清液45l1．2．1细胞培养Hela细胞系用RPMI-1640培养加251上样缓冲液，混匀后在含EB(终浓度0．5基，pH7．2—7．4，内加10％胎牛血清、青霉素100mg／m1)的15L琼脂糖凝胶电泳中电泳2．5h，电U／ml、链霉素100mg／ml，置37℃，5％CO2孵箱中压40V，紫外线灯下观察并照像。培养。每隔3～4d换培养基一次，于对数生长期时1．2．

7、4流式细胞仪检测Hela细胞凋亡率收集经加维生素A处理。8g／ml维生素A处理24、48、72h的Hela细胞，1．2．2显微镜观察维生素A对Hela细胞凋亡形态PBS洗2次，固定于70％乙醇中，4℃保存。以流式的影响收集处于对数生长期的细胞，用胰酶消化，细胞仪分析10细胞中亚二倍体细胞DNA含量及制成单细胞悬液，调整细胞浓度为5×10／ml接种二倍体细胞DNA含量。1．3统计学方法采用SPSS15．0软件进行单因素方差分析，数据用x±s表示，两两比较用t检验，P基金项目：江苏大学高级人才基金项目(J

8、DG2004008)。·通讯作者≤O．05为差异有统计学意义。34山东医药2010年第5O卷2结果会干燥而呈角质化，并演变为鳞状，最终可能发展为2．1维生素A诱导Hela细胞凋亡的形态学特征癌细胞⋯。据文献报道，维生素A一旦进人细胞光学显微镜下，Heh细胞数量减少，并出现凋亡特核，即与其特异性核受体结合，通过调节靶基因的表征，表现为细胞质高度水肿，空泡变，胞体不规则突达而发挥生物学活性，产生“维生素A效应”。起，出现核固缩、核裂解以及凋亡小体。电子显微镜