结核分枝杆菌rv3407重组蛋白、dna疫苗的制备及其免疫原性的研究

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1、分类号：密级：单位代码：10092学号：20121214硕士学位论文结核分枝杆菌Rv3407重组蛋白、DNA疫苗的制备及其免疫原性的研究单位：河北北方学院专业：内科学研究生姓名：赵亚静导师姓名及职称:赵卫国教授研冗起止日期：2013.5-2015.3提交日期：2015.5分类号：密级：单位代码：10092学号：20121214结核分枝杆菌Rv3407重组蛋白、DNA疫苗的制备及其免疫原性的研究单位：河北北方学院专业：内科学研究生姓名：赵亚静导师姓名及职称：赵卫国教授研究起止日期：2013.5-2015.3提交日期：2

2、015.5河北北方学院学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北北方学院所有。河北北方学院有权对本学位论文进行交流、公开和使用。导师签名：研究生签名：年月日河北北方学院研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。导师签名：研究生签名：年月日目录中文摘要……………

3、…………………………………………1英文摘要………………………………………………………4英文缩写………………………………………………………8研究论文前言……………………………………………………………10材料和方法……………………………………………………11结果……………………………………………………………37附图……………………………………………………………43附表……………………………………………………………54讨论……………………………………………………………56结论……………………………………………………………6

4、0参考文献………………………………………………………61综述……………………………………………………………64致谢……………………………………………………………70个人简历………………………………………………………711中文摘要结核分枝杆菌Rv3407重组蛋白、DNA疫苗的制备及其免疫原性的研究摘要全世界大概有1/3的人感染结核分枝杆菌（M.tb），其中5%～10%的感染者会发展为结核病患者，因此，对结核病潜伏感染进行有效防治至关重要。卡介苗是目前预防结核病唯一的一个疫苗，但并不能有效地预防潜伏感染发展为结核病，其免

5、疫效果并不十分确定，因此针对潜伏感染的疫苗的开发对于结核病的控制具有重要的意义。M.tbRv3407是与M.tb复苏和再激活相关的蛋白，是潜伏感染M.tb活动的标志。制备rv3407DNA疫苗可能对潜伏的M.tb有免疫清除作用，抑制M.tb的复燃，对潜伏感染人群具有免疫保护作用。因此，有可能成为一种新型的针对潜伏感染的候选疫苗，为结核病的预防和控制奠定实验基础。本研究应用生物信息学软件分析Rv3407蛋白的抗原表位，了解其抗原性；应用分子克隆技术制备了Rv3407重组蛋白；构建了rv3407DNA疫苗，并评价了该疫苗

6、在小鼠体内的免疫原性。一、结核分枝杆菌Rv3407蛋白抗原表位的预测利用DNAStar软件包中Protean软件对Rv3407氨基酸序列进行分析，采用包括二级结构、亲水性、抗原性、可及性、柔韧性、电荷分布等多参数预测其二级结构及T细胞和B细胞抗原表位。利用SYFPEITHI和RANKPEP在线远程预测其Th细胞表位。利用SYFPEITHI超基序法、BIMAS量化基序法和NetCTL在线远程预测其CTL表位。结果显示Rv3407蛋白具有丰富的二级结构和多处抗原指数较高的区段，潜在的B细胞抗原表位较多，可能位于11~26

7、、28~43、50~61、66~74、76~99位氨基酸残基或其附近，这些区域基本上含有β转角结构，亲水性、表面可能性和柔韧性指数都较高。该蛋白潜在的T细胞抗原表位也较多，可能位于2~12、22~26、34~37、40~44、56~60、1中文摘要75~79、86~93位氨基酸残基或其附近。综合SYFPEITHI和RANKPEP预测结果，共筛选出HLA-DRB1*0101、HLA-DRB1*0301、HLA-DRB1*0401、HLA-DRB1*0701、HLA-DRB1*0801、HLA-DRB1*1101、HLA

8、-DRB1*1501表型评分在23分以上或有意义的Th候选表位22个。综合分析BLAST比对结果及SYFPEITHI、BIMAS和NetCTL的预测结果，结果显示Rv3407蛋白抗原在HLA-A*0201、HLA-A*03和HLA-B7评分在18分以上或有意义的限制性CTL候选表位共有20个。二、结核分枝杆菌Rv3407的克隆、表达、纯化通过P