鼻咽癌细胞syk启动子去甲基化对基因表达及侵袭转移的影响

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1、论文题目：鼻咽癌细胞Syk启动子去甲基化对基因表达及侵袭转移的影响答辩委员会主席：答辩委员会成员：一、摘要目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．I英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4二、论文_一、Poo～前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．15分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．20结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．．⋯⋯．⋯22参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22三、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．⋯．25四、致谢⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯．．26五、综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．27六、独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34温州医学院硕士学位论文中文摘要鼻咽癌细胞Syk启动子去甲基化对基因表达及侵袭转移的影响目的研究鼻咽癌细胞株经去甲基化药物5．杂氮-2。．脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine，5-aza-CdR)处理后，其脾酪氨酸激酶(spleentyrosinel(inase，Syk)启动子甲基化水平的变化情况，以及鼻咽癌细胞株Syk基因mIⅢA、蛋白表达及鼻咽癌5．8F细胞侵袭和转移的变化情况。方法1、细胞培养与药物处理选择高分化鼻咽癌细胞株CNE

3、．1、低分化鼻咽癌细胞株CNE．2、低分化成瘤高转移鼻咽癌细胞5-8F和永生化非癌性人鼻咽上皮细胞株NP．69进行细胞培养。待细胞贴壁后在培养液中加入5．aza．CdR，经5．aza-CdR处理后的细胞株作为处理组，未经5．aza．CdR处理的细胞株作为对照组。2、重亚硫酸氢盐测序PCR(bisulfitesequencingPCR，BS·PCR)检测Syk基因启动子甲基化状态提取细胞总DNA，利用BS．PCR检测经5．aza．CdR处理前后CNE．1、CNE．2、5．8F和NP．69细胞的SykN动子甲基化程度的变化情况。3、实时荧光定量PCR(quantita

4、tiverealtimefluorescencepolymerasechainreaction，Q—RT-PCR)检NqSykmRNA的表达提取细胞总RNA，利用Q．RT．PCR检测5．aza．CdR对CNE．1、CNE．2、5．8F和NP．69细胞I拘SykmRNA表达的影响。4、Westemblot检Nt]Syk蛋白的表达提取细胞蛋白，利用Westernblot检N5．aza。CdR处理前后CNE．1、CNE．2、5．8F和NP．69细胞Syk蛋白表达的变化情况。5、Transwell细胞体外侵袭和迁移实验检N5．8F细胞侵袭转移能力利用Transwell实验

5、检测经不用浓度5．aza．CdR处理后5．8F细胞的穿膜细胞数。6、统计学分析统计学分析采用SPSSl7软件，计量资料以均数±标准差(i±s)表示，P<0．05温州医学院硕士学位论文为差异具有统计学意义。结果1、5-aza．CdR处理前后CNE．1、CNE．2、5．8F和NP．69细胞的Syk启动子甲基化程度对照组和处理组细胞I拘Syk基因启动子甲基化率CNE．1分别为31．2％士1．2％和16．8％士2．3％、CNE．2分别为52．8％士1．6％和36．4％士1．9％，5．8F分别为70．4％士2．2％和48．0％士1．9％，处理组细胞的Syk基因启动子甲基化率

6、与对照组相比存在显著差异fP<0．01)。而NP．69细胞Syk基因启动子的甲基化在5．aza-CdR处理前后均未检测到。2、5-aza-CdR处理前后CNE．1、CNE．2、5．8F和NP．69细胞的SykmRNA表达水平对照组NP．69细胞的SykmRNA的表达水平按100％计算，对照组CNE．1、CNE．2和5．8F细胞的SykmRNA的表达量分别为50．0％士1．1％、32．30／硅1．4％和28．50／硅1．0％，处理组CNE．1、CNE．2、5．8F和NP．69细胞的SykmRNA的表达量分别为75．8％士2．3％、42．00／社3．1％、36．6+1

7、．5％和99．3％士2．1％。处理组细胞SykmRNA表达量与对照组相比显著提高(P0．05)。另外，5-aza．CdR对提高高分化鼻咽癌细胞CNE．1的SykmRNA表达的影响大于低分化鼻咽癌细胞CNE一2(P<0．01)。3、5-aza．CdR处理前后CNE．1、CNE．2、5．8F和NP．69细胞的Syk蛋白表达水平对照组NP．69、CNE．1、CNE．2和5．8F细胞的Syk蛋白的表达量分别为93．7％士2．1％、43．8％士1．8％、23．60／社2

8、．3％和1