去甲基化作用对胃癌细胞生物学行为及xaf1基因表达的影响

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1、去甲基化作用对胃癌细胞生物学行为及xafl基因表达的影响【摘要】目的：探讨去甲基化药物5脱氧杂氮胞苷（5AzaCdR）对体外培养的胃癌BGC823细胞增殖活性、细胞周期和凋亡以及对此细胞株xafl基因表迗的影响.方法:用MTT法检测不同浓度5AzaCdR对细胞增殖活性的影响；PI染色和流式细胞仪检测不同浓度5AzaCdR处理72h后细胞周期分布和细胞凋亡率；RTPCR法检测用药前后xafl基因表达的变化.结果：用1X103，5X103，10X103nmol/L的5AzaCdR处理BGC823细胞6d后，试验组细胞增殖抑制率较对照组明显升高，并呈剂量依赖关系;流式细胞仪分析表明，

2、各药物浓度处理72h后凋亡率明显增加：试验组凋亡率分别为％，％和％，与对照组（土）％相比较差异显著（P【关键词】5氮2脱氧胞苷；xan基因;BGC823肿瘤细胞株；甲基化；细胞增殖；细胞凋亡【Abstract】AIM：Toobservetheeffectsofthedemethylatingagent,5Aza2'deoxyctidine(5AzaCdR),ontheproliferation,cellcycle,apoptosisandxafImRNAexpressionofstomachcancerBGC823cells.METHODS：Theproliferationof

3、BGC823cellstreatedbydifferentconcentrationsof5AzaCdRwasdetectedbyMTTassay.Assessmentofcellcycleandapopbyflowcytometry(FCtosiswereperformedM)；thechangeofxaf1mRNAexpressionwassemiPCRbeforeandafterquantifiedbyRTAzasonBGC823cellswereobservedinadosedeCdRtreatment.RESULTS：Thegrowthinhibitoryeffect

4、pendentmannerafterexposureto5AzaCdRatdifferentconcentrations(lX103,5X103,10X103nmol/L)fordifferenttime.FCManalysisshowedthattheapoptosisratesinBGC823cells[(±)%,(±)%，(±)o/o]increasedsignificantlyafterexposureto5AzaCdRfor72hascomparedwiththecontrolgroup[(±)%,P【Keywords】5AzaCdR；xaf1；BGC823；meth

5、ylation；proliferation；apoptosis0引言凋亡抑制蛋白因子家族(IAP)的成员在结构上具有1至3个高度保守的杆状病毒凋亡抑制因子重复序列(BIR)结构域[1],在肿瘤的增殖异常及对抗肿瘤药物耐受形成中发挥了重要作用.X染色体相关凋亡抑制蛋白(XIAP)是IAP中抑制Caspase活性最强的成员.XIAP相关因子1(XAF1)是一个新近发现可以拮抗XIAP抗凋亡作用的蛋白，它可以逆转XIAP对细胞的保护.XAF1在多种肿瘤细胞和组织中存在低表达或表迖缺失，XAF1的基因沉默与其启动子高甲基化明显相关[2].我们采用5AzaCdR对胃癌细胞株进行处理，检测

6、xafl基因表迗，并分析肿瘤细胞生物学行为变化，以期进一步探讨胃癌的发生机制及治疗的新方法.1材料和方法材料胃癌BGC823细胞株；RPMI1640培养液；胎牛血清；5AzaCdR；配制5AzaCdR为lmol/L的母液，-20°C保存，使用时用RPMI1640稀释为工作浓度.Tap酶；酶联免疫检测仪（BioTek公司）；Trizol（Invitrogen公司）；UV3000紫外分光光度仪；流式细胞仪（BeckmanCoulter公司）.方法细胞培养细胞贴壁生长于RPMI1640培养液中，内含100mL/L胎牛血清、1X105/L青霉素、100mg/L链霉素和2mmol/LL谷

7、氨酰胺，置于37°C50mL/LC02的饱和湿度箱中培养，每3〜4d消化传代1次.传代时，常规消化BGC823细胞，置于75mm培养瓶中，培养24h后分别用含1X103,5X103，10X103nmol/L5AzaCdR的完全培养液连续培养24，48和72h后弃去药液，用完全培养液继续培养24h后进行实验.以同体积磷酸盐缓冲液PBS（pH）处理的细胞作为对照组.培养过程中使用相差显微镜观察细胞形态的变化.MTT法绘制细胞生长曲线取对数生长期细胞，常规消化后按每孔2X103个（100PL）接种