去甲基化作用对胃癌细胞生物学行为及xaf1基因表达的影响的论文

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1、去甲基化作用对胃癌细胞生物学行为及xaf1基因表达的影响的论文【摘要】目的：探讨去甲基化药物5脱氧杂氮胞苷(5azacdr)对体外培养的胃癌bgc823细胞增殖活性、细胞周期和凋亡以及对此细胞株xaf1基因表达的影响.方法：用mtt法检测不同浓度5azacdr对细胞增殖活性的影响；pi染色和流式细胞仪检测不同浓度5azacdr处理72h后细胞周期分布和细胞凋亡率；rtpcr法检测用药前后xaf1基因表达的变化.结果：用1×103，5×103，10×103nmol/l的5azacdr处

2、理bgc823细胞6d后，试验组细胞增殖抑制率较对照组明显升高（p<0.05），并呈剂量依赖关系；流式细胞仪分析表明，各药物浓度处理72h后凋亡率明显增加：试验组凋亡率分别为（4.53±0.21）%，（8.11±1.01）%和（11.56±0.86）%，与对照组(0.51±0.01)%相比较差异显著(p<0.05).在5azacdr处理前，未检测到bgc823细胞株xaf1基因mrna表达，经过5azacdr处理后，xaf1mrna重新表达.结论：5azacdr可抑制bgc823

3、细胞增殖；促进细胞凋亡；使xaf1基因甲基化状态得到逆转，而重新表达.【关键词】5氮2脱氧胞苷；xaf1基因；bgc823肿瘤细胞株；甲基化；细胞增殖；细胞凋亡　　【abstract】aim:toobservetheeffectsofthedemethylatingagent,5aza2′deoxyctidine(5azacdr),ontheproliferation,cellcycle,apoptosisandxaf1mrnaexpressionofstomachcancerbgc82

4、3cells.methods:theproliferationofbgc823cellstreatedbydifferentconcentrationsof5azacdrttassay.assessmentofcellcycleandapoptosisedbyfloetry(fcm);thechangeofxaf1mrnaexpressioniquantifiedbyrtpcrbeforeandafter5azacdrtreatment.results:thegroannerafterexp

5、osureto5azacdratdifferentconcentrations(1×103,5×103,10×103nmol/l)fordifferenttime.fcmanalysisshoent(5×103,10×103nmol/l).conclusion:5azacdrcaninhibittheproliferationofbgc823cellsthroughblockingcellcyclesandinducingcellapoptosis.itcanalsorestorexaf1gen

6、etranscriptionsilencedbydemethylation.　　【keyethylation；proliferation；apoptosis　　0引言　　凋亡抑制蛋白因子家族(iap)的成员在结构上具有1至3个高度保守的杆状病毒凋亡抑制因子重复序列(bir)结构域［1］，在肿瘤的增殖异常及对抗肿瘤药物耐受形成中发挥了重要作用.x染色体相关凋亡抑制蛋白(xiap)是iap中抑制caspase活性最强的成员.xiap相关因子1(xaf1)是一个新近发现可以拮抗xiap抗凋亡作用的蛋白，它可以

7、逆转xiap对细胞的保护.xaf1在多种肿瘤细胞和组织中存在低表达或表达缺失，xaf1的基因沉默与其启动子高甲基化明显相关［2］.我们采用5azacdr对胃癌细胞株进行处理,检测xaf1基因表达，并分析肿瘤细胞生物学行为变化，以期进一步探讨胃癌的发生机制及治疗的新方法.　　1材料和方法　　1.1材料胃癌bgc823细胞株（兰州大学病理解剖学教研室）；rpmi1640培养液（美国gibco公司）；胎牛血清（兰州民海生物技术有限公司）；5azacdr（美国sigma公司）；配制5azacdr为

8、1mol/l的母液，-20℃保存，使用时用rpmi1640稀释为工作浓度.tap酶（上海生工生物工程技术有限公司）；酶联免疫检测仪(biotek公司)；trizol(invitrogen公司)；uv3000紫外分光光度仪（上海美谱达公司）；流式细胞仪(beckmancoulter公司).　　1.2方法　　1.2.1细胞培养细胞贴壁生长于rpmi1640培养液中，内含100ml/l胎牛血清、1×105/l青霉素、100mg／l链霉素和2