去甲基化作用对胃癌细胞生物学行为及xaf1基因表达的影响

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1、去甲基化作用对胃癌细胞生物学行为及xaf1基因表达的影响【摘要】目的：探讨去甲基化药物5脱氧杂氮胞苷(5AzaCdR)对体外培养的胃癌BGC823细胞增殖活性、细胞周期和凋亡以及对此细胞株xaf1基因表达的影响.方法：用MTT法检测不同浓度5AzaCdR对细胞增殖活性的影响；PI染色和流式细胞仪检测不同浓度5AzaCdR处理72h后细胞周期分布和细胞凋亡率；RTPCR法检测用药前后xaf1基因表达的变化.结果：用1×103，5×103，10×103nmol/L的5AzaCdR处理BGC823细胞6d后，试验组细胞增殖抑制率较对照组明显升高（P<0.05），并呈剂量依

2、赖关系；流式细胞仪分析表明，各药物浓度处理72h后凋亡率明显增加：试验组凋亡率分别为（4.53±0.21）%，（8.11±1.01）%和（11.56±0.86）%，与对照组(0.51±0.01)%相比较差异显著(P<0.05).在5AzaCdR处理前，未检测到BGC823细胞株xaf1基因mRNA表达，经过5AzaCdR处理后，xaf1mRNA重新表达.结论：5AzaCdR可抑制BGC823细胞增殖；促进细胞凋亡；使xaf1基因甲基化状态得到逆转，而重新表达.【关键词】5氮2脱氧胞苷；xaf1基因；BGC823肿瘤细胞株；甲基化；细胞增殖；细胞凋亡　　【Abstrac

3、t】AIM:Toobservetheeffectsofthedemethylatingagent,5Aza2′deoxyctidine(5AzaCdR),ontheproliferation,cellcycle,apoptosisandxaf1mRNAexpressionofstomachcancerBGC823cells.METHODS:TheproliferationofBGC823cellstreatedbydifferentconcentrationsof5AzaCdRentofcellcycleandapoptosisedbyfloetry(FCM);thechang

4、eofxaf1mRNAexpressioniquantifiedbyRTPCRbeforeandafter5AzaCdRtreatment.RESULTS:Thegroannerafterexposureto5AzaCdRatdifferentconcentrations(1×103,5×103,10×103nmol/L)fordifferenttime.FCManalysisshoent(5×103,10×103nmol/L).CONCLUSION:5AzaCdRcaninhibittheproliferationofBGC823cellsthroughblockingce

5、llcyclesandinducingcellapoptosis.Itcanalsorestorexaf1genetranscriptionsilencedbydemethylation.　　【Keyethylation；proliferation；apoptosis　　0引言　　凋亡抑制蛋白因子家族(IAP)的成员在结构上具有1至3个高度保守的杆状病毒凋亡抑制因子重复序列(BIR)结构域［1］，在肿瘤的增殖异常及对抗肿瘤药物耐受形成中发挥了重要作用.X染色体相关凋亡抑制蛋白(XIAP)是IAP中抑制Caspase活性最强的成员.XIAP相关因子1(XAF1)是一个新近发现可以拮抗XIAP抗

6、凋亡作用的蛋白，它可以逆转XIAP对细胞的保护.XAF1在多种肿瘤细胞和组织中存在低表达或表达缺失，XAF1的基因沉默与其启动子高甲基化明显相关［2］.我们采用5AzaCdR对胃癌细胞株进行处理,检测xaf1基因表达，并分析肿瘤细胞生物学行为变化，以期进一步探讨胃癌的发生机制及治疗的新方法.　　1材料和方法　　1.1材料胃癌BGC823细胞株（兰州大学病理解剖学教研室）；RPMI1640培养液（美国Gibco公司）；胎牛血清（兰州民海生物技术有限公司）；5AzaCdR（美国Sigma公司）；配制5AzaCdR为1mol/L的母液，-20℃保存，使用时用RPMI1640稀释为工

7、作浓度.Tap酶（上海生工生物工程技术有限公司）；酶联免疫检测仪(BioTek公司)；Trizol(Invitrogen公司)；UV3000紫外分光光度仪（上海美谱达公司）；流式细胞仪(BeckmanCoulter公司).　　1.2方法　　1.2.1细胞培养细胞贴壁生长于RPMI1640培养液中，内含100mL/L胎牛血清、1×105/L青霉素、100mg／L链霉素和2mmol/LL谷氨酰胺，置于37℃