新型微管蛋白抑制剂ca4类似物抗肿瘤作用分子机制的研究

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1、原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名日期：年丄月J_曰学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文

2、的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名导师签名.日期：1/0丨}年h>硕士学位论文中文摘要摘要风车子抑素A4(combretastatinA4,CA4)是目前己知微管蛋白抑制剂中活性最强的化合物之一。它能破坏增殖能力旺盛的肿瘤细胞有丝分裂纺锤体，致有丝分裂细胞阻滞于G2/M期，从而抑制肿瘤细胞增殖。基于CA4水溶性差，生物利用度低，且容易转化成几乎无活性的反式构型，临床

3、应用受到限制等缺陷，以CA4为先导化合物，成功获得几种新型高活性CA4类似物。本研究探讨CA4及其类似物40B靶向微管抑制的分子机理。运用MTT法筛选检测新型CA4类似物对肿瘤细胞和正常细胞体外增殖抑制活性，结果显示四种新型CA4类似物具有广谱高效抗肿瘤活性，以40B活性最佳，IC50为8nmol/L。以MCF-7为模型探讨40B靶向微管抑制分子机理。细胞流式术检测结果发现CA4及40B均呈浓度依赖性引发MCF-7细胞周期于G2/M期阻滞，以48h最为明显。免疫荧光法从形态学上检测MCF-7细胞微管蛋白在细

4、胞核细胞质分布和细胞凋亡，结果显示CA4及40B抑制微管蛋白聚合作用呈剂量依赖性关系，使细胞核内微管明显解聚，并能诱导MCF-7细胞凋亡。Westernblotting分析MCF-7细胞G2/M期关键调节蛋白CyclinBl、Cdc2、p-Cdc2及微管蛋白a-tubulin、（3-tubulin表达变化，结果显示CA4及40B均呈浓度依赖性上调MCF-7细胞CyclinBl蛋本课题受如下基金资助:国家fi然科学基金项0(批准号:81101655)国家自然科学基金项S(批准号：8107182)中南大学前瞻布

5、局研究重点项S(批准号：721500011)硕十予位论文中文摘要白水平表达，1"调Cdc2、p-Cdc蛋白水平的表达，但对a-tubulin、p-tubulin蛋白水平表达无影响。综上所述，40B和CA4均能以微官蛋白为祀点抑制微言蛋白聚合，通过上调MCF-7细胞CyclinBl蛋白水平表达，下调Cdc2、p-Cdc2蛋白水平的表达而引发细胞G2/M期阻滞，从而抑制肿瘤细胞增殖并诱导肿瘤细胞凋亡。为开展40B动物抑瘤的有效及安全性评价提供了重要依据。关键词：新型CA4类似物，肿瘤，微管蛋白抑制剂，细胞周期阻

6、滞，信号转导硕十予位论文英文摘要ABSTRACTCombretastatinA4isoneofthemostpotentmicrotubuleinhibitors.ItcandestroythemitoticspindleoftumorcellswithstrongproliferatecapacitywhichleadtumorcellstolaggingintheG2/Mphaseofmitosis.Basedonpoorwatersolubility,lowbioavailability,thenat

7、ureofbeingturnedintoinactivetrans-configurationeasilyandtherestrictioninclinicalapplicationofCA4,wemodifiedthemoleculeofCA4andsuccessfullyobtainedanumberofnovalCA4analogs.Inthisstudy,westudyonthetubuletargetedinhibitorinmolecularmechanismsofCA4and40B.Inthi

8、sstudy,novelCA4analogsweredetectedtoinhibitproliferationactivityinvitrooftumorcellsandnormalcellsusingMTTassays.TheresultsshowedthatthefournovelCA4analogshaveabroadspectrumantitumoractivityand40Bisthebestwhic