单羰基姜黄素类似物b19的抗肿瘤作用及其分子机制研究

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1、温州医学院硕士学位论文单羰基姜黄素类似物B19的抗肿瘤作用及其分子机制研究姓名：章汉卿申请学位级别：硕士专业：中药学指导教师：李校堃；肖健2012-05-22温州医学院硕士学位论文单羰基姜黄素类似物B19的抗肿瘤作用及其分子机制研究中文摘要目的1．研究B19对非小细胞腺癌A549细胞增殖活性的影响，对A549细胞克隆、细胞凋亡的影响；对ERStress信号通路CHOP及相关蛋白表达的影响。2．研究B19对卵巢癌细胞株A278、CP70细胞增殖活性的影响，对细胞凋亡率的影响；以及通过ERStress及ROS途径诱细胞凋亡的影响。方法1．检测

2、肿瘤抑制情况：体外培养A549、A278、CP70细胞株，采用MTT法检测化合物对其的增殖抑制作用。2．检测内质网应激相关蛋白表达情况：Westernblot法检测上述细胞在姜黄素及其类似物．B19作用下内质网应激相关蛋白表达情况。3．检测凋亡及其周期情况：用AnnexinV／PI染色，流式细胞术检测细胞凋亡及其周期的情况。4．观察A549细胞株克隆的形成：肉眼观察同等少量A549细胞株在活性化合物作用同等时间下的克隆形成情况．。5．检测ROS相关情况6．检测Caspase一3结果1．B19对非小细胞腺癌A549的作用与机制：1．1．MT

3、T结果显示B19可抑$1]A549细胞，并具呈剂量依赖性，在浓度为20mM时，对细胞株增殖的抑制作用明显增强。1．2流式细胞仪检测显示，与阴性对照DMSO相比，B19可明显诱导A549细胞凋亡。证实B19抗肿瘤活性发挥作用是通过凋亡途径进行的。1．3通过平板克隆实验我们发现，A549细胞的克隆形成能力随B19浓度的增高而降低，可以认为B19对肺腺癌的生长有显著的抑制作用。1．4Westernblot分析显示，A549在姜黄素及其类似物作用下，内质网应激相关4温州医学院硕士学位论文蛋白均表达，其抗肿瘤作用可能与内质网应激有关。。2．B19对

4、卵巢癌A2780、CP70的作用与机制：2．1MTT结果显示B19可抑制A2780、CP70细胞，并具呈剂量依赖性，在浓度为20．M时，对细胞株增殖的抑制作用明显增强。2．2流式细胞仪检测显示，与阴性对照DMSO相比，B19可明显诱导A2780、CP70细胞凋亡。证实B19抗肿瘤活性发挥作用是通过凋亡途径进行的。2．3通过ROS检测试验我们发现，ROS细胞透性的指标DCF-DA，对B19剂量依赖。证实B19可通'r血os途径诱导细胞凋亡。2．4Westernblot分析显示，A2780、CP70在姜黄素及其类似物作用下，内质网应激相关蛋白

5、均表达，其抗肿瘤作用可能与内质网应激有关。2．5通过Caspase一3检测试验我们发现，我们发现，用209MB19处理2411的CP70细胞Caspasc．3的激活量明显加强，然而姜黄素不增强。结论1．B19通过ERStress诱导A549细胞的凋亡。2．B19通过ERStress诱导卵巢癌细胞的凋亡，姜黄素对A2780细胞的抑制作用强于CP70，B19对A2780、CP70的抑制作用都要强。关键词单羰基姜黄素类似物；抗肿瘤；内质网应激途径。温州医学院硕士学位论文英文摘要Anti—tumormolecularmechanismofB19O

6、bjective1．B19ontheproliferativeavtivityofnon-smallcelladenocarcinomacelllineA549；theA549cellclones；apoptosia；impactontheexpressofERStresssignalpathwayCHOPandreliedproteins．2．B19onovariancancercelllineA278，CP70proliferativeactivity,apoptosisrate；andapoptosisinducedbyERStre

7、ssandROSpathways．Methods1．StudytheinfluenceofBl9onthecolonyformation：wetreatthecellwiththeB19fortwoweeks．Theabilityofcellcloneformationwasdetectedbytheplatecolonyformingassay．2．Studyofdose-effectrelationship：westudytheiranti—tumorcellproliferationdose—effectrelationshipus

8、ingMTTmethod．3．Usingwesternblot，westudytheexpressionofCHOPproteinanditsrelatedproteinstreatedwit