茶叶籽蛋白酶解物的制备及其抗氧化活性_麻成金

《茶叶籽蛋白酶解物的制备及其抗氧化活性_麻成金》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、※生物工程食品科学2013,Vol.34,No.19207麻成金，杨万根，黄群，余佶，冯磊吉首大学林产化工工程湖南省重点实验室，湖南张家界；吉首大学食品科学研究所，湖南吉首摘要：采用碱性蛋白酶对茶叶籽蛋白进行有限酶解，运用响应面法对酶解工艺条件进行优化，并对所得酶解物的抗氧化能力进行测定。结果表明：酶解茶叶籽蛋白的优化工艺条件为：加酶量、底物质量分数、、酶解温度℃、酶解时间。经测定，质量浓度为茶叶籽蛋白酶解物对自由基、羟自由―基·和超氧阴离子自由基·的清除率分别为、和，同时酶解物还具有一定的还原能力和对

2、亚油酸自氧化的抑制能力，且呈现一定的量效关系，说明茶叶籽蛋白酶解物具有较好的抗氧化活性。关键词：茶叶籽蛋白；碱性蛋白酶；酶解物；抗氧化活性，，，，；Abstractfreeradical―··Keywords中图分类号：；文献标志码：文章编号：1002-6630(2013)19-0207-06近年来，对植物蛋白研究的热点问题之一是对其多并对该酶解物的体外抗氧化效果进行研究，考察其还原―肽保健功能的开发和利用。植物蛋白抗氧化肽能够通过能力和清除超氧阴离子自由基·、羟自由基·、清除自由基抑制氧化反应，其抗氧

3、化机理主要表现为螯自由基能力以及对亚油酸自氧化的抑制能力，从而合金属离子、作为供氢体或供电子体清除自由基和促进为茶叶籽蛋白的综合利用提供一定的实验参考。过氧化物分解。因此，研究植物蛋白制备抗氧化肽具有积极意义。目前，国内外对植物蛋白有限酶解制备抗氧化肽已有较多文献报道，且大部分植物蛋白酶解物都材料与试剂具有较好的抗氧化活性，但至今尚未见茶叶籽蛋白抗氧化肽的相关研究文献报道。茶叶籽由湖南省古丈县茶叶基地提供，采用碱溶茶叶籽中含有丰富的蛋白质，本课题组对茶叶籽蛋酸沉法提取得到茶叶籽粗蛋白，经测定蛋白质含量为

4、白的提取进行了研究。本实验以文献采用的碱溶。酸沉法制得的茶叶籽粗蛋白为原料，利用碱性蛋白酶制碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶湖州米纯备茶叶籽蛋白酶解物，以水解度和自由基清除率为生物科技有限公司；二苯基-2-三硝基苯肼，色指标，运用单因素试验和响应面法优化酶解工艺条件，谱纯美国公司；氢氧化钠、盐酸、无水乙醇、从而制备出自由基清除率高的茶叶籽蛋白酶解物，甲醛、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、三氯乙2082013,Vol.34,No.19食品科学※生物工程酸、硫酸亚铁、双氧水、硫氰酸铵、铁氰化钾、邻二氮

5、酶解物还原能力的测定菲、三羟甲基氨基甲烷、亚油酸、邻苯三酚等均为参照文献的方法测定酶解物的还原能力。取国产分析纯试剂。一定浓度样品与磷酸缓冲液和仪器与设备铁氰化钾溶液混合后在，流水型紫外可见分光光度计日本岛津公司；速冷，加入三氯乙酸溶液，离心，取上清液，加入蒸馏水和型真空冷冻干燥机日本公司；型，混合均匀，后在波长处测吸光度，计上海精密科学仪器公司；型台式高速离心机其吸光度与还原力能力成正比。长沙平凡仪器公司；型恒温水浴锅河南金博仪―酶解物清除·能力的测定器公司。采用邻苯三酚自氧化法。参照文献的方法测定酶

6、方法―解物清除·的能力，清除率按式计算。茶叶籽蛋白酶解物的制备vᇍ✻ˉvḋક称取适量茶叶籽蛋白粉，按底物含量要求加入蒸馏⏙䰸⥛/%=Ü100vᇍ✻水，于恒温水浴中加热溶解～，按优化工艺条件碱性蛋白酶加酶量、值、酶解温度、酶解时间进行式中：v样品为样品组邻苯三酚自氧化速率；v对照为对酶解处理，然后进行℃、灭酶，冷却后照组邻苯三酚自氧化速率。离心，取上层清液真空浓缩，冷冻干燥制得茶叶籽酶解物清除·能力的测定蛋白酶解物样品。采用邻二氮菲法。参照文献的方法测定酶解物清酶解条件的单因素试验除·的能力，在波长处测定

7、吸光度，对·的清以水解度和酶解产物对自由基清除率为指除率按式计算。标，进行单因素试验，每组实验进行次重复取平均值，(AḋકˉAখ↨)ˉ(AᤳӸˉAぎⱑ)⏙䰸⥛/%=Ü100分别考察蛋白酶种类碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋AˉA᳾ᤳᤳӸ白酶、酶解时间、、、、、、加酶量、式中：A样品为样品组的吸光度；A参比为样品参比的、、、、底物质量分数、吸光度；A损伤为损伤管的吸光度；A未损为未损伤管的吸光、、、、值、、、、度；A空白为空白对照组的吸光度。和酶解温度、、、、等因素对茶叶籽酶解物对亚油酸自氧化抑制能力的测定

8、蛋白酶解反应的影响。采用亚油酸自氧化抑制体系，参照文献的方法。酶解条件的优化取茶叶籽蛋白酶解物溶于磷酸缓冲溶液在单因素试验基础上，利用响应面法设中，配制成质量浓度为、、溶液，计，以加酶量、底物质量分数、值和酶解温度个因素分别加入无水乙醇和亚油酸，加蒸馏水至为变量，以酶解产物对自由基清除率为响应值，对，密封，，每隔测定吸光度次。酶解茶叶籽蛋白制备抗氧化肽的工艺参数进行优化。吸光度的测定：取反应液，依次加入水解度的测定乙醇、硫氰酸铵溶液和参照文