荞麦多肽的制备及其抗氧化活性的研究

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1、万方数据万方数据※工艺技丕受品照学2堂场f．27，№．JD3∞本研究以多肽浓度和水解度(DH)作为评价指标，拟将苦荞麦蛋白采用蛋白酶水解成为低分子量的苦养麦多肽，并对其抗氧化活性进行研究。研究采用木瓜蛋白酶、Protamex酶、A1calase酶、Flavourzvme蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶对苦荞麦蛋白进行酶解效果的对比，并研究了超声波预处理对酶解效果的影响，从而确定出酶法制备苦荞多肽的最佳工艺条件；并采用亚油酸．硫氰酸铁法测定各种酶酶解后制得的荞麦多肽液在脂类中的抗氧化活性。1材料与方法1．

2、1材料与仪器养麦复合蛋白自制：Flavourzyme复合风味蛋白酶(酶活力l596U／mg)、Neutrase中性蛋白酶(酶活力为944U／mg)、AlcalaseFoodGrade水解蛋白酶(酶活力为13981U／mg)、Protamex复合酶(酶活力10677U，mg)NOVO公司；木瓜蛋白酶(酶活力为849U／mg)Enzybel公司；L一酪氨酸(BR)、亚油酸Sigma公司；茚三酮、四肽标准物(BR)国药集团化学试剂有限公司。754型分光光度仪上海箐化科技仪器有限公司；TL．18M型台式高速冷冻离

3、心机上海市离心机械研究所：VC750型超声波仪(额定功率750W)SONICSandMATERIALS．INC；R型旋转蒸发仪上海申生科技有限公司。1．2酶解液多肽浓度的测定1．2．1多肽标准曲线的绘制称取Gly—Gly一．Ib-A唱标准物0．50009，溶解并用50IIll容量瓶定容至50ml，即10mg／ml，分别吸取O、0．2、O．4、0．6、0．8、1．0、1．2、1．4、1．6、1．8ml标准溶液于试管中，加水补足6ml，各加入双缩脲试剂4ml，混合摇匀后，在室温的条件下放置30min后，采用7

4、54型分光光度计测定光密度(540nm)。根据光密度值与多肽浓度绘制标准曲线。1．2．2酶解液多肽浓度的测定吸取酶解液4m1，加入lml10％TCA溶液，沉淀酶解液中的大分子蛋白质及大分子物质，然后以3000r，min离心沉淀10min，然后吸取上清液1ml，加入5ml水，再加入4m1双缩脲试剂，混合摇匀后，在室温的条件下放置30min后，用754型分光光度计进行光密度测定(540Ⅱm)。同时做空白。酶解液多肽浓度是根据光密度值在标准曲线查得的毫克数，再乘以稀释倍数得出。1．3酶解液．NH：的测定1．3．

5、1酪氨酸标准曲线的绘制称取0．05009酪氨酸(BR)溶解并定容成50ml，所得浓度为1mg／ml，分别吸取0、0．2、0．4、0．6、0．8、1．0、1．2、1．4ml标准溶液于试管中，加水补足4ml，加入pH8．0的缓冲液1ml，再加入1ml1．5％茚三酮溶液，然后在沸水浴中水浴加热l5min后取出，并冷却至室温，用比色管定容至50ml，再用754型分光光度计进行光密度测定(570nm)。根据光密度值与酪氨酸浓度绘制标准曲线。1．3．2苦荞麦复合蛋白酸解液．NHz总量的测定称取1．37119苦荞麦复合

6、蛋白，加入6m01几的盐酸100ml，放入85℃的恒温干燥箱中，加热消化24h，取出冷却，过滤除去不溶物，然后用真空旋转蒸发器浓缩至10“，用40％Na0H调pH值至中性，定容至100IIll，此即为酸解原液。吸取10．Oml原液，定容至50ml，即为1：5稀释液，吸取稀释液1“于试管中，加水补足4rnl，加入pH8．0的缓冲液1IId，再加入1Inl1．5％茚三酮溶液，然后在沸水浴中水浴加热15min后取出，并冷却至室温，用比色管定容至50ml，再用754型分光光度计进行光密度测定(570nm)，同时做

7、空白。1．3．3酶解后多肽液中．NH：总量的测定吸取4ml酶解后多肽液，加入1m110％TCA，沉淀酶解后多肽液中的大分子蛋白质和大分子物质，然后以3000r，min离心沉淀10min，再吸取上清液1ml，加水补足4ml，加入1mlpH8．0的缓冲液，再加入1ml1．5％茚三酮试剂，然后在沸水浴中水浴加热15min后取出，并冷却至室温，用比色管定容至50ml，用754型分光光度计进行光密度测定(570nm)，同时做空白。1．3．4DH的计算DH的计算是根据光密度值在标准曲线上查得酪氨酸的浓度，乘以稀释倍数

8、，再根据下式计算：DH=酶解后多肽液的上清液中的总．NH2。量，苦荞麦复合蛋白总．NHz量×100％1．4各种蛋白酶的水解工艺研究以多肽浓度和DH为指标，运用单因素试验分别选择木瓜蛋白酶、F1avourzyme复合风味蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶、A1calasefoodgrade水解蛋白酶、Protamex复合酶酶解苦荞麦复合蛋白的最佳酶用量、pH、固液比、温度、酶解时间。1．5超声波预处理对酶解效果的影响影响高强度超