egfr突变型nsclc的egfr-tki耐药机制体外研究

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1、中图分类号密级EGFR突变型NSCLC的EGFR—TKI耐药机制体外研究InvestigationontheEGFR—TKIresistancemechanismsofNSCLCwithEGFRmutations锄vitro计：学位论文：87页表格：6个插图：22幅赵宝霞指导教师：吕申教授申请学位级别：博士学位学科(专业)：病理学与病理生理学培养单位：大连医科大学完成时间：二。一三年四月答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人

2、已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：丝室整签字日期：丝年』月丛目关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“

3、√”)：作者签名：导师签名：1．保密口，在年解密后适用本授权书。2．不保密彩彩萄住l舛日期：≯口13年厂月，占日日期：彻侈年j厂月／占目目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1515(一)日IJ萄⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第一部分EGFR第19外显子缺失突变NSCLC细胞株

4、NCI．H1650在TKI作用下的生物学变化及耐药产生机制(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．1细胞系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．2药品⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．3主要实验器材⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．4主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯192．1Gefitinib耐药细胞株NCI—H165

5、0／GR的建立⋯⋯⋯192．2耐药细胞株NCI．H1650／GR的生物学特征⋯⋯⋯⋯222．3耐药细胞株NCI—H1650／GR的EGFR信号通路部分节点蛋白的检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯232．4耐药细胞株NCI．H1650／GR的EMT相关蛋白检测⋯⋯262．5耐药细胞株NCI—H1650／GR的EGFR和KRAS基因突变检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯262．6免疫细胞化学的判断标准⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯262．7统计学方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯271

6、．Gefitinib耐药细胞株NCI．H1650／GR的建立⋯⋯⋯⋯271．1NCI．H1650细胞EGFR和KRAS基因突变⋯⋯⋯⋯⋯271．2MTT法检测细胞抑制率和耐药指数⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯271．3耐药细胞株NCI。H1650／GR的gefitinib作用生长抑制曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯282．耐药细胞株NCI．H1650／GR的生物学特征⋯⋯⋯⋯⋯282．1耐药细胞株NCI．H1650／GR细胞形态学⋯⋯⋯⋯⋯282．2耐药细胞株NCI．H1650／GR生长曲线和群体倍增时间⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29

7、2．3耐药细胞株NCI—H1650／GR细胞周期分布⋯⋯⋯⋯292．4耐药细胞株NCI—H1650／GR细胞凋亡⋯⋯⋯⋯⋯⋯303．耐药细胞株NCI．H1650／GR的EGFR信号通路部分节点蛋白表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯303．1免疫细胞化学法检测EGFR、pYl068一EGFR、KRAS和BRAF蛋白表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯303．2Westem—Blotting法检测EGFR、pY1068一EGFR、KRAS和BRAF蛋白表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯314．耐药细胞株NCI—H1650／GR的EMT⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯314．1E。cadherin蛋白表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯314．2vimentin蛋白表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯