hedgehog信号通路在egfr-tki敏感和耐药非小细胞肺癌细胞中的作用机制研究

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1、南方医科大学2010级博士学位论文Hedgehog信号通路在EGFR．TKI敏感和耐药非小细胞肺癌细胞中的作用机制研究MechanismofhedgehogsignalingpathwayinEGFR—TKIsensitiveandresistanceNSCLCcells课题来源：学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院白晓燕吴一龙肿瘤学学术型博士广东省人民医院2013年3月30日广州博士学位论文Hedgehog信号通路在EGFR．TKI敏感和耐药非小细胞肺癌细胞中的作用机制研究博士研究生：白晓燕指导教师：吴一龙教授摘要肺癌是全

2、球死亡率最高的恶性肿瘤。非小细胞肺癌(non．smallcelllungcancer,NSCLC)占所有肺癌病例的85％左右。以铂类为基础的两药联合化疗是晚期NSCLC的一线标准治疗方案，其中位无进展生存(progressionfreesurvival，PFS)仅有5个月左右IlJ。分子靶向药物的出现，为肺癌的治疗带来了很大的希望。对于上皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)敏感突变患者，EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFRtyrosinekinaseinhibitor，EGFR．TKI)的有

3、效率达71．2％，现己成为EGFR敏感突变型晚期NSCLC患者的一线用药【2】。EGFR．TKI用于二线或三线治疗时也优于最佳支持治疗【3J。但是几乎所有的患者最终都不可避免的出现耐药，EGFR-TKI原发耐药或继发耐药的现象大大限制了其在临床的应用。现已报导的与EGFR-TKI耐药有关的机制包括T790M二次突变[4,51、MET扩增眄，71、肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor，HGF)过表达【81以及KRAS突变【9，lo】等。Hedgehog(H11)信号通路是胚胎期的重要信号通路之一，调节细胞增殖、分化、

4、上皮间质转化(epithelial．to—mesenchymaltransition，EMT)以及干细胞维持，以使组织器官正常发育。Hh信号通路在成人组织中的异常激活与多种肿瘤的形成、自我更新及耐药有关，这其中包括肺癌。不断有证据表明恶性肿瘤中EMT可导致肿瘤细胞迁移侵袭能力增加，并对传统的治疗方法产生耐药【11，12】。癌干细胞样细胞(cancerstem．1ikecell，CSC)是另外一个导致肿瘤复发耐药的原中文摘要刚13】。最近有研究显示肿瘤在EMT诱导过程中会产生大量CSCtl4】。而ml信号通路通过其下游的直接靶基因Snail

5、及ABCG2等对肿瘤中的EMT过程及CSC进行着紧密调节。现已有多个Hh信号通路抑制剂进入I期和II期的临床试验，并在皮肤基底细胞癌的治疗中取得了良好的结果。在胚胎期，Hh信号通路和EGFR信号通路在脑干细胞的增殖过程中具有协同作用。因此我们推测，在NSCLC中，Hh信号通路的异常激活有可能代偿性减弱了EGFR-TKI的治疗效果。Hh信号通路抑制剂与EGFR．TKI的联合应用或许可以有效提高原发或继发耐药患者对EGFR-TKI的反应性。本课题以具有EGFR—TKI敏感突变、继发耐药突变和原发耐药突变的NSCLC细胞作为体外实验模型，系统检

6、测了EGFR-TKI敏感、继发耐药及原发耐药NSCLC中Hh信号通路的活性差异，论证了Hh信号通路对EGFR-TKI敏感性的影响，并对Hh抑制剂和EGFR-TKI联合用药的效果进行了评价。方法第一章Hedgehog信号通路在非小细胞肺癌癌与癌旁组织表达差异首先采用实时荧光定量PCR的方法对20对配对的NSCLC肿瘤组织和癌旁组织中的Hh信号通路分子PTCHl、PTCH2、SMO、GLH、GLl2及GLl3的表达差异进行比较。应用SPSSl3．0进行统计分析。计量资料采用均数4-标准差表示。先对数据进行正态及方差齐性检。因所有分子的表达均符

7、合正态分布及方差齐，两组间差异的比较用配对样本f检验或两独立样本f检验，多组间差异的比较用one．wayANOVA，各组间两两比较采用LSD法。两组数据的相关性分析如为正态分布者采用Pearson相关，如不符合正态分布者用spearman相关进行分析。对不同组间生存差异的比较采用Kaplan-Meier生存分析以及log．rank检验进行分析。P<0．05被认为差异有统计学意义。II博士学位论文结果1患者的临床病理学特征：本次研究是一个小样本的初步研究，共有20对患者的癌与癌旁组织的配对样本。所有患者全部为病理学证实的肺腺癌。早期(I．I

8、I期)和晚期(III—IV期)患者各10例。有6例经直接测序法证实为EGFR突变，2例为KRAS突变，5例为野生型，另外有7例基因状态未检测。2Hh信号通路分子在肺腺癌中的表达均较正常肺组织低