Hedgehog通路对非小细胞肺癌细胞侵袭的调控作用研究

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1、分类号：R3单位代码：10346密级：学号：2015111012044硕士学位论文中文论文题目：Hedgehog通路对非小细胞肺癌细胞侵袭的调控作用研究英文论文题目：TheregulationofHedgehogpathwayoninvasionofnon-smalllungcancercells申请人姓名：张鑫指导教师：王建秋专业名称：人体解剖与组织胚胎学研究方向：分子细胞生物学所在学院：医学院论文提交日期2018年3月Ｈｅｄｇｅｈｃ＾通路对非小细胞肺癌细胞侵袭的调粹作用研究论文作者签名：泰指导教师签名：论

2、文评阅人１：评阅人２：评阅人３：评阅人４：评阅人５：答辩委员会主席：１卷於委员１：來科委员２：你—干委员３：ｌｊ委员４：ｎ停，委员５：［答辩曰期：ＭＨ４；TheregulationofHedgehogpathwayoninvasionofnon-smalllungcancercellsAuthor’ssignature:Supervisor’ssignature:ExternalReviewers:ExaminingCommit

3、teeChairperson:ExaminingCommitteeMembers:Dateoforaldefence：杭州师范大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果：：他教杏机抝的ｅ份，也不包含为获得杭州师范大学沌ａ或证书而使用过的材料一。与我同．丁作的同志对本研究所做的仟何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字口期：Ｗ抑Ｚ月十口学

4、位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解抗抑｜师范大学有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权杭州师范太学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字曰期法年Ｚ月曰签字曰期：么）１＾：＜月曰Ｙ十致谢时光荏苒，三年的时光弹指一挥间。回想刚刚走进师大时，仿佛是在昨日。非常庆幸在人生中最美的年华，走进马云老师眼中

5、“未来世界最好的一所大学”，度过一段难忘的时光。感谢我的导师王建秋老师对我的关怀和指导。导师仁爱，正直，作风严谨，为我树立了良好的榜样。感谢导师的耐心与宽容，帮助我成长与进步。感谢刘俊平老师为我们大家提供如此优渥的实验环境。刘老师知识渊博，治学严谨，为人亲和，又有崇高的科研梦想，他一直是我们大家科研路上的引导者，是我们追随的榜样。感谢王立辉老师、李建峰老师、梁颖师姐、王刚师兄在我完成课题过程中给予的耐心指导和热情帮助。感谢我的家人，我的爷爷奶奶，爸爸妈妈，感谢您们一直以来对我无私的爱与关怀。同时感谢林青等好朋友们，感谢你们一直以

6、来的陪伴与支持。你们让我拥有无数个幸福的瞬间，岁月的脚步依然匆匆，但这三年的生活将永生难忘。在此，谨向所有关心和帮助过我的人表示最诚挚的感谢!最后，衷心感谢三年来杭师大医学院及杭师大科技园对我的培养！感谢在百忙之中，抽出宝贵时间，评阅我论文的各位专家评委，在此衷心地说声感谢，谢谢你们！I摘要研究目的:本研究通过构建人Hedgehog通路关键分子SMO/GLI1过表达/低表达的非小细胞肺癌细胞株，验证SMO和GLI1对非小细胞肺癌细胞侵袭的调控作用,并通过分析SMO/GLI1对肺癌细胞上皮间质转化(Epithylial-Mesen

7、chymalTransition,EMT)的调节作用，初步探讨其调控非小细胞肺癌细胞侵袭的分子机制。研究方法:（1）基于带有HA或Flag标签的质粒pcDNA3.1构建人SMO和GLI1过表达载体，通过脂质体转染H1299和A549细胞，构建SMO/GLI1过表达非小细胞肺癌细胞株；设计并合成靶向人SMO/GLI1的小干扰RNA（siRNA），通过脂质体转染上述两种肺癌细胞，构建基因敲低细胞株。通过荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹方法，检测基因及蛋白水平过表达或敲低效果。（2）应用Transwell小室实验，检测SMO和GLI1过

8、表达/敲低对非小细胞肺癌细胞侵袭的影响。将浓度为1mg/ml的基质胶(Matrigel)铺于上室聚碳酸酯膜上，每孔50ul，待胶凝固后接种培养细胞16h后进行固定及DAPI染色，荧光显微镜下每组随机选择5个视野进行拍照，使用ImageJ软件分析穿膜细胞数，以上室