牛γ-干扰素在重组杆状病毒中的表达及其抗病毒活性的测定

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1、!"卷#期微生物学报!（"#）：’%#(’%"$%%"年&月!日!"#$%&"’()&(*(+&"$,&-&"$!)*+,$%%"!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!牛!!干扰素在重组杆状病毒中的表达及其抗病毒活性的测定/，$//$/"秦立廷，王喜军，胡森，刘思当，步志高（/中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨/’%%%/）（$山东农业大学动物科技学院泰安$"/%/4）（#内蒙古农业大学动物科学与医学学院呼和浩特%/%%/4）（!南京农业大学动物医学院南京$/%%

2、0’）摘要：研究利用-8B52G5-8B杆状病毒表达系统构建含有牛!5干扰素（-G?9+,9+E,@H,@G+5!，-GIJK5!）完整开放阅读框的供体质粒LJ8ME-8B2N感受态细胞获得重组穿梭质粒@-8B79Q5-GIJK5!，转染MH0昆虫细胞救获/5-GIJK5!，转化OP/%-8B表达-GIJK5!的重组杆状病毒@-8B5-GIJK5!。采用抗-GIJK5!单克隆抗体作为一抗进行间接免疫荧光（IJ.）及间接6RIS.检测，表明-GIJK5!在重组杆状病毒@-8B5-GIJK5!感染的MH0昆虫细胞中获得正确表达。利用TST"UJV5NO-W细胞系统测定@-GIJK

3、5!抗病毒活性，重组杆状病毒表达重组-GIJK5!（@-GIJK5!）能有效抑制水疱性口炎病毒（TST）在牛肾细胞（NO-W）上的复制，@-8B5-GIJK5!感染MH0昆虫细胞上清抗病毒活性为$X/%’IYZ7R，而且其抗病毒活性可以被鼠抗原核表达重组-GIJK5!免疫血清阻断。结果表明：@-GIJK5!在重组杆状病毒@-8B5-GIJK5!感染的MH0昆虫细胞中获得良好表达，并具有高效抗病毒活性。关键词：!5干扰素；牛；重组杆状病毒；抗病毒活性中图分类号：["4，[0#文献标识码：.文章编号：%%%/5&$%0（$%%"）%#5%’%#5%’干扰素（I+E,@H,@G+，

4、IJK）是在特定的抗原刺激下达重组蛋白更接近天然结构。为此，本研究采用由细胞分泌的一类具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节-.152_5-.1杆状病毒表达系统（-.152_5-.1功能等生物活性的糖蛋白，是发现最早、研究最多的-8B*3G?9@*M6^L@,MM9G+SFME,7）对-GIJK5!全基因进行细胞因子。根据IJK的细胞来源和结合受体不同，了表达，构建含有-GIJK5!完整开放阅读框（_‘J）的将IJK分为"型和#型。"型IJK主要有$、%两个重组杆状病毒，感染昆虫细胞表达出具有高效抗病［/］亚型，分别主要由淋巴细胞和成纤维细胞产生，它毒活性的@-GIJK5!。国内外研究

5、表明，-GIJK5!在抗们作用于同一受体，可抑制病毒OK.复制和蛋白质水泡性口炎病毒、口蹄疫病毒、牛病毒性腹泻病毒、合成，活化KW（K8E*@83933,@）细胞，促进NP1"牛呼吸道合胞体病毒、牛白血病病毒以及副流感5#［&(4］（N8]G@>9MEGBG7L8<939EFBG7L3,^"）类分子提呈抗原。型的试验中均取得了良好效果。我国每年因牛#型IJK为!5干扰素，主要由2细胞和KW细胞产病毒性疾病的爆发给养牛业带来巨大损失，研制出［$］生，与"型IJK相比除具有广谱抗病毒活性外还具有抗病毒活性和免疫调节活性的基因工程有多种免疫学活性，既可以单独作为生物制剂应用@-G

6、IJK5!在牛病防治上具有十分重要的意义。于一些疾病的防治，又可作为免疫佐剂增强疫苗的［#，!］"材料和方法免疫效果。［’］/04&年OG*;38M等以人!5干扰素基因为探针"#"材料从牛的BOK.文库中克隆出牛!5干扰素（-G?9+,"#"#"病毒株、质粒和细胞：表达绿色荧光蛋白报9+E,@H,@G+5!，-GIJK5!）基因，此后国内外学者利用基告基因的重组水疱性口炎病毒TST"UJV由本实因工程技术生产重组-GIJK5!（@-GIJK5!）的研究也验室构建、滴定并保存。质粒LNO/4525-GIJK5!开始兴起。与原核表达系统相比，杆状病毒表达系（-GIJK5!基因克隆

7、于6BG‘&位点）、原核表达质粒2N统可以对外源蛋白进行多种翻译后加工和修饰，表L625#%8（a）、供体质粒LJ8ME-8B/（I+?9E@G;,+）；基金项目：国家科技攻关项目（$%%!-.’/0./0，$%%’-."//./%）；国家“0"#项目”（$%%’1-’$#$%%）"通讯作者。2,3：4&5!’/54’0#’%&$；657893：:;<=>?@9A8BAB+作者简介：秦立廷（/04/C），男，山东泰安人，硕士，主要分子免疫学和分子病毒学研究。657893：D9+39E9+;=F8>GGA