鹅γ干扰素表达及抗病毒活性的研究

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1、论文答辩日期2010．06．06究^乒，～㈩IIIIIIIIIIIIIIIIlY1738306广西大学学位论文原创性声明和学位论文使用授权说明学位论文原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是在导师指导下完成的，研究工作所取得的成果和相关知识产权属广西大学所有。除已注明部分外，论文中不包含其他人已经发表过的研究成果，也不包含本人为获得其它学位而使用过的内容。对本文的研究工作提供过重要帮助的个人和集体，均已在论文中明确说明并致谢。论文作者签名：1鹞_’口年易月“日学位论文使用授权说明本人完全了解广西大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：本人保证不以其它单位为第一署名单位发

2、表或使用本论文的研究内容；按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在不以赢利为目的的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容。请选择发布时间：?‘口即时发布口解密后发布?‘(保密论文需注明，并在解密后遵守此规定)谢糍叼新躲、年6月‘f日一I—I，达及抗病毒活性的研究摘要活的T细胞和NK细胞产生的一类细胞因子，作为生物药剂具有广阔的应用前景。本研RNA中成功扩增到鹅IFN-y基因，并将其克与Genbank_L已布的鹅的IFN吖核苷酸序列进行比较，其同源性

3、均在99．2％以上，氨基酸同源性高于98．2％。将克隆在pMDl8-T载体中的鹅IFN-7基因插入原核表达载体pGEX．6P．1，得到质粒、pGEX⋯6P1IFN．1，，转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导4h，裂解菌体作■。～SDS．PAGE分析，得到约43KD融合表达蛋白特异条带，用GST亲和纯化柱对原核表达产物中目的蛋白进行纯化，得到1．2mg／L的纯化蛋白。同时构建pcDNA3．1(+)-IFN吖真核表达质粒，经测序鉴定后，在室温条件下，质粒pcDNA3．1(+)一IFN·丫浓度20rte,／mL，BHK21细胞密度106个／mL，电穿孔仪参数设为425V电压、25

4、心电容、连续脉冲2次，用400此转化体积转染BHK21细胞，待细胞贴壁后经过浓度为600舭的G418连续筛选14天后，出现抗性细胞克隆，将阳-[生BHK21细胞上清液进行Western-blot鉴定，检测结果证明鹅IFN．丫在BHK21细胞中得到表达。最后，用100TCID50病毒量在鹅副粘．．病毒／鹅胚成纤维细胞系统上测定表达蛋白的抗病毒活性，观察不同处理组r的细胞形态并用RT．PcR方法鉴定，发现原核表达蛋白稀释倍数小-T'104和真核表达蛋白稀释倍数小于105均可抑制GPMV复制，按照Reed．Mueneh法计算、r’V原核和真核表达的鹅IFN吖抗病毒效价分别为2．

5、0x103U／mL和1．3x104U／mL，表明原核和真核表达蛋白都具有良好的抗病毒活性。关键词：鹅丫一干扰素原核真核表达抗病毒活性II气r0-—P‘’EXPRESSIONOFGOOSEGAMMA．INTERFERONANDDETERM【]NATIONOFTHEANTIVIRALACTIVITYABSTRACTInterferon—gamma(IFN一丫)isproducedbyactivatedcytotoxicTcellsandnaturalkillercells．Owninghighantiviralactivity，ithasbroadapplicationpro

6、spectsasbiologicalagents．Inthisstudy，cDNAofgooseIFN吖genewasamplifiedfromtotalRNAofperipheralbloodlymphocytesandwasclonedandsequenced．ComparedwiththepublishednucleotidesequenceofgooseIFN-7onGenbank，nucleotideandaminoacidhomologyofthe495bpofGooseIFN吖genewerehigherthan99．2％and98。2％，respectiv

7、ely．Afterthat，theclonedIFN-7geneWasinsertedintoprokaryoticexpressionvectorpGEX一6P一1，andtheplasmidpGEX⋯6P1IFN吖wasobtainedandtransformedintoEColiBL21，induced4hbyIPTG，andthenSDS—PAGEanalysisforlysedwerecarriedout，theresultshowedthatspecificfusionproteinbandwasabout43KD