丹顶鹤α干扰素的克隆、表达及抗病毒活性分析

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2、节请巧请学位级别学科专业：理．、．；ｆ琴莫＃讓霉篆／，‘＇‘）７Ａ＇过；０１２〇巧６５。：文提交曰期：５拿省另论文答辩曰期Ｖ竿月４日／手ｈ它：次＾，１％．＾｜■；－－：马建章－ｍ答辩委员会主席咳‘游鐵Ｖｖ；＇＇ｉ＂．．—＇－．．、＃巧鴻立而分．奇４－卢‘产ｖ＾令护；；是；：．：；議ｆ解．ｕ；；痴擁鐵義構謂繼；；巧讓遷！纏歲鞭来＾绿句顯譲乂乂余操讀镇雲１謂宿震課ｎ｜ｆ寶誰游義＇＇．＇号．＾．－茂扣、ｖ．；Ｊ／Ａ蓉．，逆垂跳、鱗預祭墙带、皆病賴学校代码：１０２２５学号：Ｓ１５５１７

3、学化＾文丹顶鹤ａ干扰素的克隆、表达及抗病毒活性分析巧蒜指导教师姓名：邢明伟东北林业大学申请学位级别：硕±学科专业：生理学论文提交日期：２０１５年４月论文答辩日期：２０１５年６月１５日授予学位单位：东北林业大学授予学位日期：２０１５年６月答辩委员会主席：马建章论文评阔人：东將４欠等Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｏｄｅ：１０２２５ｙＣＲｅｇｉｓｔｅｒＣｏｄｅ：ＳＩ５５１７ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒＣｌｏｎｉｎｅｘｒｅｓｓｉｏｎａｎｄ

4、ａｎｔｉｖｉｒａｌｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｏｆｇ，ｐｙＲｅｄ－ｃｒｏｗｎｅｄＣｒａｎｅ－ａｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎＣａｎｄｉｄａｔｅ；ＬｉＴｉａｎＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＭｉｎｗｅｉＸｉｎｐｇｇＡｓｓｏｃｉａｔｅＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｒｅｅＡｌｉｅｄｆｏｒ：ＭａｓｔｅｒｇｐｐＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙＤａｌ：ｅｏｆＯｒａｌＥｘａｍｍａｔｉｏｎ：２０１５．０６Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ：ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｙｙ

5、＾摘要一－－ａ干扰素（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎａ，ＩＦＮａ）是机体白细胞产生的种细胞因子，具有抗病毒繁。殖、抗邮瘤生长和免疫调节等多种生物学功能，是机体防御系统的重要组成部分近些一年来，并定进展，目前己有商品化的，动物干扰素的研究主要集中于经济动物取得了。（Ｇｒｗ鸡、犬、猪重组干扰素产品在市场上应用迄今为止，国内外尚未有关于丹顶鹤ｘｍｅｗｋ）干扰素方面的相关报道。丹顶鹤是大型涉禽，在湿地环境中属于食物链的＿／巧＂＂上层，被称为湿地之神。，是湿地生物多样性的关键物种我国是世界上丹顶鹤栖息的一一主要国家的国鸟候选鸟上报国务

6、院，是国家级保，国家林业局已经把丹顶鹤作为唯、、护动物。近年来，由于环境变迁和人为干扰，禽流感新城疫马立克氏疾病时常暴２６００，发，野生丹顶鹤数量逐年下降，全球现存数量仅为只左右而东亚的大陆种仅１５００只左右。ｃｒ－本研究巧用简并引物和基因组步移ＰＣ艮技术首次克隆出丹顶鹤ａ干扰素（ＩＦＮａ）ＦＮ－５％，基因，该基因全长７４１ｂ２４６个氨基酸ａ的同源性小于４ｐ，编码，与哺乳动物Ｉ－—ａ基因的同源性在６０，与禽Ｉ脚８０％之间，其中与繫鹤的亲缘关系最近同源性高达－８０．７％。ｃｒＩＦＮａ成熟肤基因表达引物根据表法载体的酶

7、切位点设计，目的基因亚克隆到＋－ＰＡ畑电泳分析３２ａ中，原核表达载体ｐＥＴ，在大肠杆菌化２１中进行表达。经ＳＤＳ（）ｃ－ｒＩＦＮａ的强合蛋白主要Ｗ包涵体的形式存在，大小约４３拉Ｄａ。该包涵体经纯化、透析复性处理后加到鸡胚成纤维细胞上，而后进行水泡巧Ｐ炎病毒（ＶＳＶ）攻击，结果发现５ｃｒ－７ｘ重组ＩＦＮａ可Ｗ抑制水泡性Ｕ炎病毒的复制，生物活性最高时达到１．８ｌ０Ｕ／ｍｇ；被Ｎ－－兔抗ｃｒＩＦａ多克隆抗体中和后的重组ｃｒＩＦＮａ将不再具备抗病毒功能。间接免疫巧光结ｃｒＩＦＮ－ａ基因也可在鸡胚成纤维细胞的细胞质中得到表达，果表明，

8、。此外我们在克隆－－－－ＩｃｒＩＦＮａ的过程中曾设计了２对简并引物（ＡＩＦＴＹｌａ和ＡＩＦＴＹ化，ＰＯＡＵ和ＡＦ