截短型kgf-1在杆状病毒表达系统中的表达及其生物活性研究

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1、温卅1医学院硕士学位论文———————————————————————————————————————二——一．论文题目：堂型K鲤：!查枉丛痘壹麦鲨丕统虫笪麦达区墓生塑适丝婴究答辩委员会主席：整二盈．垫毽答辩委员会成员：王盘鞋垫簦坌勤奎盘接卣盟自蛰亟超温』、I,I医学院硕士学位论文目录缩略词表⋯．．．⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯．．．．3中文摘要．⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．⋯．．4英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．6jL上_：=二刚吾．．．⋯⋯⋯．．．．⋯．．．．．．．．．．．．⋯⋯⋯⋯．．．．⋯⋯8第一部分重组杆状病毒载体Bacmid—k

2、gfl的构建引言⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10实验仪器与材料．⋯⋯⋯．．．⋯．．⋯⋯．．．⋯⋯⋯．．．．．10实验方法．．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯．⋯⋯．．123．1设计引物PCR扩增埏f1基因片段⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．123．2PCR反应产物的切胶回收i．．．．．．⋯⋯⋯．．．．．．．．．．．．．．133．3中间载体T-埏fl的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．133．4转移载体pFastBac—kgfl的制备⋯⋯．⋯⋯⋯．．．．．．⋯153．5穿梭载体Bacmid—kgfl的制备．．．⋯．．⋯．．．⋯⋯．．．．．．17实验结果．．⋯．⋯．⋯⋯．．．⋯⋯．⋯．．

3、．．⋯．⋯⋯．．．．184．1PCR扩增蜒f1基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．184．2中间载体T-埏n质粒的菌液PCR鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯194．3中间载体T_kgfl的Pstl、Notl双酶切反应⋯．⋯⋯．．．．．．194．4pFastBac载体的风水Notl双酶切反应⋯⋯⋯⋯⋯⋯．204．5转移载体pFastBac．kgfl的菌液PCR鉴定⋯⋯⋯⋯⋯．204．6转移载体pFastBac．kgfl的Pstl、Notl双酶切鉴定⋯⋯⋯．2l4．7穿梭载体Bacmid．kgfl的菌液PCR鉴定⋯⋯⋯⋯⋯．．21分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯21第二部分KGF．

4、1在sf9细胞中的表达及纯化引言⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．23实验仪器与材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．23实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．253．1sf9昆虫细胞的培养⋯⋯⋯⋯．．．⋯．．．．．⋯⋯．．．．．．253．2Bacmid．kgfl转染昆虫细胞⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯．⋯．．263．3收获病毒⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯．．．．26温州医学院硕士学位论文3．4病毒滴度的测定⋯⋯．⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯．．⋯．．273．5蛋白表达条件初步优化．⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯．．⋯．．273．6KGF．1蛋白的纯化⋯⋯．⋯⋯一．⋯．．．⋯⋯⋯⋯．．283

5、．7KGF．1的HPLC鉴定⋯⋯⋯．．．．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．28实验结果⋯⋯⋯．．．．．．⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯．．⋯⋯．．．294．1正常及感染病毒之后的sf9昆虫细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．294．2昆虫细胞生长状态随病毒侵染时间的变化⋯⋯⋯⋯⋯294．3KGF．1表达条件初步优化．．⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．．．．．．304．4KGF．1蛋白的纯化⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．．．314．5KGF．1的HPLC鉴定⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯．．．．32分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．32第三部分KGF．1的生物活性研究引言⋯⋯⋯⋯⋯．．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．34‘jI五⋯

6、⋯⋯⋯⋯．．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．jq实验仪器与材料．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．一⋯．．⋯⋯⋯⋯．34实验方法．．．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．⋯．．．⋯⋯⋯．⋯353．1KGF．1促细胞增殖活性测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．353．2KGF．1促毛囊生长活性测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．35实验结果⋯．⋯．．．．．⋯⋯．⋯．．⋯⋯．．．⋯⋯⋯．．⋯364．1MTT法检测KGF．1促细胞增殖活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．364．2KGF．1促进小鼠毛囊生长研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．37分析与讨论⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯38全文总结．．．．⋯．⋯．．．．．．．．⋯．．．．．⋯⋯．．⋯．．．

7、⋯⋯．．39参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．40附录．．．．．．．．⋯⋯．．．．．．．．．⋯．．．．．⋯．．．．．⋯．．．⋯．．⋯43致谢．．．．．．．．．⋯⋯．．．．⋯．⋯．．．．．⋯⋯．⋯⋯．⋯．．．．．44综述⋯．．．．．．⋯．⋯．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．45参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．53论文独创性声明⋯⋯．．．⋯⋯．．．．．．．．⋯⋯．⋯⋯．．⋯．．56温州医学院硕士学位论文——————————————————————————————————————————————————————一-缩略