天蚕素A截短肽在大肠埃希菌中的高效表达及活性分析.pdf

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1、20中国抗生素杂志2010年1月第35卷第1期文章编号：1001．8689(2010)01-0020-04天蚕素A截短肽在大肠埃希菌中的高效表达及活性分析杨细媚文阳安万祥辉李朴刘靳波涂植光(重庆医科大学检验系，临床检验诊断学教育部重点实验室，重庆市重点实验室，重庆400016)摘要：将构建好的含抗菌肽天蚕素A(cecropinA，CA)截短肽CA19(36、210)1～5倍串连体[~pET-3lb(+)载体进行诱导表达，其表达量比单体表达明显提高。将融合蛋白用亲和层析法将其纯化，其纯度达~U90

2、％以上。纯化融合蛋白免疫BALB／c小鼠，制备了其特异的多克隆抗体。纯化串连融合蛋白用溴化氰切割成单体检测其活性，发现均具有抑菌活性。本研究为抗菌肽的基因工程制备提供了新途径。关键词：抗菌肽；天蚕素A；串连表达；抑菌活性；多克隆抗体中图分类号：R978．1文献标识码：AHigh·levelexpressionofantimicrobialpeptidececropinA—derivativesinE．coliandanalysisoftheirantibiacterialactivitiesYa

3、ngXi—mei，WenYang-an，WanXiang—hui，LiPu，LiuJing-boandTuZhi—guang(KeyLaboratoryofLaboratoryMedicalDiagnostics，MinistryofEducation，DepartmentofMedicalAnalysis，ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016)AbstractThepET-3lb(+)vectorsincludingtandemrepetitiv

4、esequencesofcecropinA(CA)一derivativeCA19(36，210)1—5wereexpressedintheEcolistrainBL21(DE3)．High—levelexpressionproductswereobtainedafterinducingbyIPTG．TheexpressionproductswerepurifiedbyHis·Bindchromatography．SDS-PAGEandBandscananalysisshowedthattheta

5、rgetproteinswerehighlypurifiedandthepuritywashigherthan90％．UsingtherecombinantproteinsofCAderivativestoimmuneBALB／cmice，theCAderivatives—specificantibodieswereobtainedwhichcandetecttheCAexpressioninheterogenyexpressionsystems．Purificationproductswere

6、cleavedintomonomerbyCNBrandtheantibacterialactivitiesofmonomerwereinvestigatedbyinhibitionexperimentwithEscherichiacoli，Enterobactercloacae，Klebsiellapneumonia，PseudominasaeruginosaandStaphylococcusaureus．Ourresultsprovideanewapproachforthepreparatio

7、nofantibioticpeptides．KeywordsAntimicrobialpeptide；CecropinA；Tandemexpression；Antiberactrialactivity；Polyclonalantibody由于抗菌素的大量使用，耐药菌株和多重耐药有几百种抗菌肽被相继发现并相应构建了重组体，菌株不断增加，抗菌肽(antibacterialpeptides)正是在在原核、真核和昆虫等表达体系中得到表达s】。但这种形势下出现的一类具有发展潜力的新型抗菌药由于抗菌肽本身的

8、抗菌活性造成对工程菌的毒性，物。抗菌肽对革兰阳性菌、革兰阴性菌和真菌等都因此不易表达，或表达水平很低。天蚕素(cecropin)具有快速有效的杀灭作用【t，z】，且不易产生耐药性[3]，对细菌、真菌和肿瘤细胞均有较强的杀伤作用，对因此得到密切关注。自瑞典科学家Boman在惜古比天正常细胞损伤较小，由于具有差异毒力大等优良特蚕(Hyalophoracecropia)中发现抗菌肽以来【1，已性，故对它有较多的研究。在昆虫和真核系统中均收稿日期：2009—07．20基金项目：国家自然科学基金资助项目(