dj-1基因在肺癌中的作用及其相互作用蛋白分析

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1、中图分类号UDC硕士学位论文学校代码!Q533DJ．1基因在肺癌中的作用及其相互作用蛋白分析TheroleofDJ-1geneinlungcanceranditsInteractingproteinanalySlS-●。--一-作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：吾

2、J指导教师：论文答辩日期型7．r．M7魏旺丽病理学与病理生理学肺癌的发病机制湘雅医院李萃副教授詹显全教授答辩委员会主席中南大学湘雅医院2013年05月●一毫无≤／原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文

3、中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：三丛年上月!日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。牮吼巫年￡月丛日本课题受以下基金资助1、

4、国家自然科学基金：肺鳞癌转移相关蛋白DJ-I促肿瘤转移的分子机制研究(30972970)；2、中南大学湘雅医院引进人才基金(詹显全)资助。DJ．1基因在肺癌中的作用及其相互作用蛋白质分析中文摘要目的：为了阐明DJ．1蛋白在肺癌中的作用及寻找其相互作用蛋白，采用RNA干扰技术下调DJ．1基因在肺鳞癌细胞SK．MES．1和HTB．182中的表达，分析DJ．1表达下调对SK．ⅧS．1和HTB．182细胞生物学行为的影响。然后转染DJ．1表达质粒，通过串联亲和纯化质谱(TAP．MS)技术寻找DJ．1相互作用蛋白，探讨DJ．1的分子作用机制。方法：构建靶向DJ．1基因siRNA慢病毒载体(重

5、组慢病毒中含有绿色荧光蛋白标记)，感染SK-MES．1和HTB．182细胞(DJ．1siRNA组)，并设立慢病毒载体对照组(BlanknegativecontrolgroupNC组)及空白对照组(Blankcontrol；BC组)。用荧光显微镜确定感染效率，Western印迹法检测各组细胞中DJ．1蛋白表达水平，四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力，流式细胞术测定细胞周期(FCM)并NTranswell小室实验检测细胞体外迁移侵袭能力。另外，构建带有链霉素结合肽标签(SBP)、钙调蛋白结合肽标签(CBP)的DJ．1表达质粒，用脂质体稳定转染DJ．1siI矾AHTB．182和H

6、TB．182、DJ．1siIⅢASK．MES．1和SK．MES．1细胞，TAP．MS技术以寻找DJ．1的相互作用蛋白。结果：与阴性对照组(blanknegativecontrol；NC组)及空白对照组(blankcontrol；BC组)LL较，DJ．1siRNA组的DJ．1蛋白表达明显受到抑制，MTT结果显示细胞增殖能力明显减弱，FCM结果表明G1／G2期细胞数增多和S期细胞数减少，Transwell实验结果表明细胞周期受阻、细胞体外迁移和侵袭能力显著减弱俨

7、DJ．1基因具有促进细胞增殖和体外迁移侵袭的作用。成功构建DJ．1质粒稳定表达的细胞系，并鉴定了三个潜在的DJ．1蛋白相互作用蛋白质为细胞角蛋白1(Keratinl)、细胞角蛋白10(Keratinl0)和NADPH氧化酶活化蛋白P47(P47Px)。关键词：肺癌；DJ．1；细胞增殖；细胞周期；相互作用蛋白分类号：R734．2TheroleofDJ·1geneinlungcanceranditsinteractingproteinanalysls●■l●AbstractObjectiveToexploretheeffectofDJ．1geneonbiologicalbehavior

8、soflungcancercells，RNAinterferencetechnology(siRNA)wasusedtoinhibittheexpressionofDJ．1genein1ungsquamouscellcarcinomaSK-Ⅳ匝S-landHTB．182cells．andtoobservethechangesofthebiologicalbehaviorsofthosetwotypesofcells．Moreover,toexplorethemolec