肺癌转移相关蛋白（lcmr1）相互作用蛋白的初步筛选

《肺癌转移相关蛋白（lcmr1）相互作用蛋白的初步筛选》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、军医进修学院硕士学位论文英文缩略词表英文缩写英文全称中文词义LCMRILungc砒ic．el"metastasis-relatedprotein1肺癌转移相关蛋白1PCRPolymerasechainreaction聚合酶链式反应mRNAMessengerribonucleicacid信使核糖核酸DNADeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸eDNAComplementarydeoxyribonucleicacid互补脱氧核糖核酸UASUpstreamactivationsequence上游激

2、活序列BDBindingdomainDNA结合结构域ADActivationdomain转录激活结构域MCSMultiplecloningsite多克隆位点dNTPDeoxy-ribonucleosidetriphosphate三磷酸脱氧核(糖核)苷ODOpticaldensity光密度E叽AEthylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸LiAcLithiumacetate醋酸锂PEGPolyethyleneglycol聚乙二醇3-AT3-amino-1，2，4．mazole三氨

3、基三唑SDSSodiumdodecylsulphate十二烷基硫酸钠PAGEPolyacrylanminegeleleetrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳PVDFPolyvinylidenedifluoride聚二氟乙烯DMSODimethylsulfoxide二甲亚砜PMSFPhenylmethylsulfonylfluoride苯甲基磺酰氟化物BSABovine8eruinalbumin牛血清白蛋白KDKilodalton千道尔顿bpBasepair碱基对rpmRevolutionperminu

4、te每分钟转速MMoleperliter摩尔每升军医进修学院研究生学位论文原创性声明秉承我院“敬业、勤奋、求实、创新”的学风，本人声明：所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得我院或其他教育机构的学位及证书而使用过的材料，对本文的研究作出贡献的个人或集体，均已在文中做了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。研究生学位论文版权使用授

5、权书本人保证毕业离院后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为军医进修学院或解放军总医院。学院有权保留并向国家有关部门或机构送交论文原件、复印件和电子版本，可以采用影印、缩印、扫描或其它手段保存论文以供被查阅和借阅。学院可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)。论文作者签名：编日期：夥n乒料刻磴氧膨澎：节，节叼唧蜘黼军医进修学院硕士学位论文肺癌转移相关蛋白(LCMRl)相互作用蛋白的初步筛选中文摘要目的：肺癌转移相关蛋白l(1ungcancel"metastasisrelatedprotein1，

6、LCMRl)的编码基因是我们实验室采用mRNA差异显示技术克隆到的新基因(GenBankID：AYl48462)，目前功能不明确，为了研究该基因的功能，我们采用酵母双杂交系统从预转化人肝文库筛选LCMRl的相互作用蛋白，为进一步研究该基因的功能提供线索．方法：(1)PCR扩增pGEX-5T-LCMRl载体中的LCMRl编码区序列，通过引入EcoRI和PstI内切酶住点，将LCMRl编码区克隆到酵母双杂交系统中的pGBKT7载体，得到诱饵质粒pGBKT7-LCMRl，转化酵母茵AHl09后，检测BD-LMC

7、Rl融合蛋白的表达，LCMRl蛋白的转录激活活性及对宿主茵AHl09的毒性；(2)转化了诱饵质粒pGBKT7-LCMRl的酵母菌AHl09与转化了人肝文库质粒的酵母菌Y187进行交配培养，利用营养缺陷型培养基，初步筛选阳性克隆：(3)重复检测报告基因的表达和去除阳性克隆中多余的质粒；(4)提取阳性克隆中的质粒DNA，用PeR和酶切的方法减少重复克隆，然后转化大肠杆菌DH乩，利用含氨苄青霉素的LB培养基筛选AD文库质粒转化子，提取^D文库质粒；(5)将pCBKTT-LCMRl质粒和^D文库质粒共转化酵母菌A

8、Hl09，转化混合物铺板于营养缺陷培养基，再次验证其相互作用；(6)阳性克隆中AD文库质粒测序及生物信息学分析．结果：(1)PCR和测序鉴定pGBKT7一LCMRl载体构建成功，转化AHl09，BD-LCMRl融合蛋白成功表达，LCMRl蛋白无转录激活活性和宿主毒性；(2)通过文库筛选得到72个阳性克隆；(3)经报告基因激活检测．多余质粒去除剩余57个克隆；(4)经酶切归类获得30阳性克隆；(5)共转化再次验证相互作用后仍为阳