肺癌相关蛋白的筛选与鉴定论文

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1、肺癌相关蛋白的筛选与鉴定论文【摘要】目的：应用蛋白质组学方法筛选肺癌相关蛋白，为阐明肺癌发生的分子机制和预后研究提供理论依据.方法：收集8例手术切除的新鲜肺癌组织及同一患者手术切缘的癌旁组织，提取可溶性总蛋白.应用等电聚焦（IEF）电泳和十二烷基磺酸钠聚丙烯酰凝胶电泳（SDSPAGE）技术将可溶性总蛋白分离，得到肺癌的蛋白质组分析型双向电泳图谱，经PDQuest凝胶图像分析软件分析后找出差异蛋白点.胶内酶解差异表达的蛋白点，基质辅助电离解析飞行时间质谱（MALDITOFMS）获得肽质量指纹图谱(PMF)，搜寻蛋白质数据库，并运用生物信息学鉴定蛋白质.freel,17cm）,3/10A

2、mpholyte,尿素,.freela公司.双向电泳系统（IPGphor等电聚焦仪、PROTEANⅡxicell电泳仪、GS800图像获取仪、PDQuest7.1凝胶图像分析软件）为美国BioRad公司产品.1.2方法1.2.1固相pH梯度双向凝胶电泳提取组织可溶性总蛋白，定量后进行双向电泳.第1向等电聚焦电泳程序如下：50V主动水化，16h（17℃）；250V除盐，30min；1000V除盐1h；升压5h至1×104V，聚焦至8×104Vh；第2向SDSPAGE电泳条件如下：压缩电流（5mA/gel/17cm），分离电流（30mA/gel/17cm）.1.2.2双向电泳图谱分析利用

3、PDQuest软件内部支持的图像扫描装置GS800获取图像.1.2.3胶内酶解及MALDITOFMS鉴定将扫描分析后的胶置于明亮的灯光下用硅烷化的枪头切取蛋白点，用2mg/L胰蛋白酶胶内酶解蛋白，得到的样品由上海基康生物技术有限公司协助完成MALDITOFMS鉴定，获得检测样品的肽质量指纹图谱.1.2.4数据库检索根据各肽段的m/z数据，利用Mascot（prospector.ucsf.edu/）和Profound(129.85.19.192/profoundbin/assspectrometry:fortheidentificationofproteinsseparatedb

4、ygels［J］.Electrophoresis,2000,21(11):2105-2114.［5］RuseM,LambertA,RobinsonN,etal.S100A7,S100A10,andS100A11aretransglutaminasesubstrates［J］.Biochemistry,2001,40(10):3167-3173.［6］FungLF,LoAK,YuenP,HuangCQ,etal.StructureofrebinanthumancyclophilinJ,anovelmemberofthecyclophilinfamily［J］.ActaCrystallogrD

5、BiolCrystallogr,2005,61(3):316-321.［10］HopaMJ,etal.Translatingbiomarkersintoclinicalpractice:prognosticimplicationsofcyclophilinAandmacrophagemigratoryinhibitoryfactoridentifiedfromproteinexpressionprofilesinnonsmallcelllungcancer［J］.LungCancer,2004,46(3):313-323.TAG：