骨桥蛋白新功能表位的筛选与鉴定

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1、上海交通大学博士学位论文中文摘要骨桥蛋白新功能表位的筛选与鉴定摘要骨桥蛋白(osteopotin，OPN)，也称为早期T淋巴细胞激活因子1，它是一种多功能的细胞外基质蛋白，具有多种生理和病理功能，包括骨的修复，肿瘤和炎症。OPN蛋白在多发性硬化症、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和炎性肠炎等自身免疫性疾病的病理部位明显增高。OPN作为自身免疫病发病潜在的关键因子已成为人们关注的焦点。T细胞介导的炎症在自身免疫病中起着非常重要的作用。OPN通过和细胞表面的相应受体相互作用，诱导其下游的信号转导通路，介导淋巴细胞的迁移及活化。OPN分子上具有

2、多个不同的功能表位，每～个功能表位所结合的受体不同，从而介导不同的功能。值得注意的是OPN的N端(包括第四和第五外显子)的受体其生理功能还未确定。为了进一步研究OPN分子中的功能表位及其在自身免疫性疾病中的作用，我们利用杂交瘤技术制备了两株新的抗OPN单克隆抗体：23C3D3和F8E11；通过噬菌体随机肽库筛选技术，鉴定了两株抗OPN抗体的抗原表位分别为WLNPDP和QLYreKVV。23C3D3能够有效抑制II型胶原诱导的关节炎小鼠模型的疾病进程，甚至能够显著改善已经建立的类风湿性关节炎模型小鼠的症状。23C3D3也能够有效抑制促炎症

3、因予的产生和关节炎小鼠关节组织中T淋巴细胞的浸润。在CIA小鼠来源的淋巴细胞模型中，表位肽23P(包含有WLNPDP基序)和表位WLNPDP的阻断抗体23C3D3能有效抑制OPN诱导的细胞粘附、迁移和存活。突l上海交通大学博士学位论文中文摘要变WLNPDP构建OPN突变体，突变后的OPN对淋巴细胞活化的能力显著减弱。功能实验的结果显示：WLNPDP通过诱导趋化因子CCL2，CCL3，CCL4，CXCLl和CXCL5表达促进淋巴细胞的迁移。另外，,WLNPDP还通过活化转录因子NF．r．B通路、改变促凋亡蛋白Bcl一2和抗凋亡蛋白Bim的

4、表达量的平衡维持T淋巴细胞的存活。这些结果证明：表位．WLNPDP是OPN蛋白诱导淋巴细胞迁移和存活的重要功能域。在类风湿性关节炎和其他自身免疫性疾病发生发展中可能起着重要作用。这为类风湿性关节炎等自身免疫病提供了重要的治疗靶点。关键词：骨桥蛋白，功能表位，自身免疫病，噬菌体展示，类风湿性关节炎，抗体2上海变通大学博士学位论文英文摘要SCREENINGANDIDENTIFICATIONOFOPNNOVELFUNCTIONALDoMAINABSTRACTOsteopontin(0PN；alsocalled‘earlyTcell-activ

5、ationgene1’)isamultifunctionalproteinthathasbeenlinkedtomanyphysiologicalandpathologicalevents，includingboneremodeling，cancerandinflammation．ThemuchhigherexpressionofOPNatthesiteofpathologyinseveralautoimmunediseases，includingmultiplesclerosis，systemiclupuserythematosus，

6、rheumatoidarthritisandinflammatoryboweldisease，hasfocusedattentiononthismoleculeasapotentiallycriticalfactorinpathogenesis．Tcell—mediatedinflammationplaysanimportantroleinautoimmunediseases．Thebindingof0PNtoavarietyofcellsurfacereceptorsinducessignalingevenmthatpromotece

7、lladhesion，migrationandsurvival．OPNhasdifferentfunctionaldomainsandeachfunctionaldomainresultsindifferentfunctionsbyinteractionwithunidenticalreceptors．Sofar,thephysiologicorpatho-physiologicrolesofthefarN-terminalosteopontindomains(includingexons4and5)havenotyetbeendefi

8、ned．Toidentifynovelfunctionalepitopesof0PN，wedevelopedtwomonoclonalantibodiesspecificforhuman0PNbyclass