MAEL基因在乳腺癌中的表达及相互作用蛋白的筛选.pdf

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1、分类号学校代码10542密级学号200814020040MAEL基因在乳腺癌中的表达及相互作用蛋白的筛选ExpresionofMAELgeneinbreastcancerandScreeningoftheProteinsInteractingwithMAEL指导教师姓名、职称周建挞塾援韭鳇麴援湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一一年五月一苓一一，牛直月摘要lIIlillIlllllUlUll111IllIY1913039许多肿瘤激活了生殖细胞特异表达基因，这类在多种肿瘤组织中高表达、但在正常组织中的表达仅限于睾丸的精细胞的基因被称为癌一睾

2、丸基因。癌一睾丸抗原被广泛用作肿瘤免疫治疗的靶标，也可作为癌症诊断和预后的分子标志。已有研究结果表明MAEL基因是一个睾丸生殖细胞特异表达基因，在睾丸以外的其他正常人体组织中没有表达。本文通过RT—PCR检测人类五个不同类型的癌细胞系中MAEL的mRNA表达，发现MAEL在肺癌细胞(NCI-H358)、乳腺癌细胞(1IIDA一肥一231，MDA一飓一453)、结肠癌细胞(SW480)和前列腺癌细胞(DUl45和LNCaP)中都有不同程度的表达。MAEL在睾丸和癌细胞中特异表达说明了MAEL是一个癌／睾丸基因中的新成员。为了探究MAEL基因转

3、录调控的机制，本文克隆并分析了MAEL基因启动子，发现MAEL基因上游-216至U+150之间的区域是MAEL基因基本启动子，在转录起始点附近存在一个CpG岛(-325至U+148)。采用DNA亚硫酸氢盐测序法测定了两种乳腺癌细胞中MAEL基因启动子CpG岛的甲基化状态，发现在MCF一7细胞(无MAEL基因表达)和MDA-MB-231细胞(MAEL基因高表达)中，主要是位于基本启动子区的1个GC盒和2个WTl结合位点中的胞嘧啶甲基化程度不同。用DNA甲基化抑制剂5-aza-CdR处理细胞，发现MAEL基因的mRNA水平显著提高，这些结果说明

4、MAEL基因的转录受到其基本启动子的甲基化的调控。为了研究MAEL在癌症中的作用机制，本文通过免疫共沉淀结合质谱的方法，在乳腺癌细胞MDA-MB-231和肠癌细胞SW480中分离与MAEL相互作用的蛋白，共分离蛩J205种蛋白。采用DAVID软件对这些可能与MAEL相互作用的蛋白质进行G0功能注释和聚类分析，结果表明：从分子功能来看，这些与MAEL相互作用的蛋白多数是RNA结合蛋白和DNA结合蛋白，从所处的细胞位置来看，这些蛋白多数以核糖核蛋白的形式存在，位于胞质和线粒体中居多。参与的生物过程主要是RNA加工和大分子复合物的组装。本文首次发

5、现睾丸特异表达基因MAEL在癌细胞中的表达，并研究了MAEL基因的表达调控及筛选了与MAEL蛋白相互作用的蛋白，为进一步了解癌症发生原因和MAEL基因功能奠定了基础。关键词：MAEL，乳腺癌，癌一睾丸基因，DNA基化，蛋白质相互作用ⅡABSTRACTManygermline“。specificgenesareaberrantlyactivatedinvariousmalignancies．Thegenesthatarenormallyexpressedonlyingermcellsofthetestis，andyetareaberrantl

6、yexpressedinarangeofhumancancersarecalledcancer—。testisgenes．Cancer—testisantigensarewidelyapplicableastargetsforcancerimmunotherapyandmolecularmarkersfordiagnosisandprognosisofcancer．PreviousstudiesshowedthatMAELgeneisatestis—specificgene．Here，weexaminedtheexpressionofMAE

7、LmRNAbyRT—PCRinfivetypesofhumancancercell1ines，andfoundthatMAELisubiquitouslyexpressedinlungcancer(NCI—H358)，breastcancer(MDA—MB一231，MDA—MB-453)，coloncancer(SW480)andprostatecancer(DUl45andLNCaP)．ThespecificexpressionintestesandcancercelissuggeststhatMAELisanovelmemberofth

8、ecancer—testisgeneclass．ToinvestigatetranscriptionalregulationofMAELgene，weclonedandanaly