蛋氨酸对顺铂引起的内耳毒性保护机制的研究

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．。l英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．。5研究论文蛋氨酸对顺铂引起的内耳毒性保护机制的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯99胃U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯一材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l0结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯．37讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．。42结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46综述药物性耳聋及防治措施的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．50致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯59个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60中文摘要蛋氨酸对顺铂引起的内耳毒性保护机制的研究摘要目的：顺铂是在临床当中广泛应用的化疗药物，主要用于卵巢癌、睾丸癌、肺癌、头颈部肿瘤和膀胱癌。虽然

3、其抗肿瘤的疗效可以肯定，但是它的副作用在治疗的过程中和治疗后发生，这些副作用包括消化道反应、肾毒性、神经毒性和耳毒性。听力损伤的主要特点是双侧进行性、不可逆性的，往往累及的是高频听力，严重时可以累及中低频听力。目前的研究大多集中在顺铂的听力损伤方面，但顺铂导致的前庭功能紊乱同样不能忽视，前庭功能的紊乱可直接引起患者眩晕并丧失行动能力，这样就严重影响了许多肿瘤病人康复后的生存质量。顺铂导致内耳毒性的机制目前尚未完全阐明，其对耳蜗形态的影响主要表现在Corti器的外毛细胞、血管纹和螺旋神经节三方面，而前庭组织的形态学暂时还没有充分的报道可供参考。活性氧簇(I的S)在顺铂

4、内耳毒性中所起的作用得到广泛认可。ROS积聚后产生的亚硝酸盐可以破坏蛋白质的结构和功能；ROS还作用于构成细胞膜的多不饱和脂肪酸，使之变性生成具有更强毒性的4．羟基壬烯醛(4．HNE)，4．HNE与cE+内流密切相关，而Ca2+内流可直接导致细胞凋亡的发生。此外，耳蜗中存在大量缝隙连接蛋白，即Connexin26(Cx26)和Connexin30(Cx30)，对于正常的听力是必不可少的，Cx26和Cx30因在遗传性耳聋中的作用而被广泛关注，但两种蛋白是否参与了顺铂导致的耳毒性和前庭毒性的发病机制，国内外目前还没有相关研究。在预防耳毒性上，蛋氨酸可以减少顺铂导致的听功

5、能损伤和耳蜗毛细胞的丢失，是一种很好的内耳保护药物。我们将通过动物实验来研究蛋氨酸在功能学、形态学、氧化应激水平和凋亡水平上对顺铂引起的内耳毒性是否均具有保护作用，以及连接蛋白Cx26和Cx30是否参与了顺铂导致的耳毒性和前庭毒性，蛋氨酸能否对Cx26和Cx30在顺铂中的变化产生影响。方法：30只雄性昆明小鼠按照随机原则分为①对照组(n：10)②顺铂组(n-10)③蛋氨酸+顺铂组(n=10)。①对照组：腹腔注射生理盐水2ml，1次／天，连续3天；②顺铂组：腹腔注射顺铂溶液15mg／kg体重，中文摘要1次／天，连续3天；⑧蛋氨酸+Jl颐铂组：首先腹腔注射蛋氨酸溶液40

6、0mg／kg体重，一个小时后，腹腔注射顺铂溶液15mg／kg体重，1次／天，连续3天。三组昆明小鼠在造模前和造模后，都接受听觉脑干反应(ABR)和前庭诱发肌电位(ⅦⅧ)的测试来评估听力功能和前庭功能，依据不同的实验要求来收集基底膜组织和前庭组织的标本。通过基底膜及前庭组织铺片HE染色和myosin．VI染色来观察各组毛细胞的存活情况；通过脂质过氧化产物4-HNE免疫组织化学和TUNEL凋亡检测来研究各组内耳中的氧化应激水平和凋亡情况；通过Cx26和Cx30免疫荧光组织化学染色及Cx26和Cx30westernblot检测来观察两种蛋白在各组中的表达，从而研究蛋氨酸是

7、否在上述方面对顺铂引起的耳毒性和前庭毒性具有保护作用。利用SPSSl3．0统计软件进行统计学分析，结果以均数4-标准差形式表示，以P<0．05为存在显著性差异的检验标准。结果：1一般观察结果：对照组小鼠正常生长，好动，耳廓反应灵敏；顺铂组小鼠毛发无光泽，消瘦，不好动，耳廓反应不灵敏；蛋氨酸+顺铂组小鼠正常生长，毛发有光泽，略消瘦，好动，耳廓反应较灵敏。2听觉脑干反应(ABR)测试结果：实验前各组实验动物ABR阈值、潜伏期及波间期没有统计学差异；试验后对照组小鼠阈值为(3．25+3．35)dBSPL，顺铂组小鼠阈值为(63．10士19．87)dBSPL，蛋氨酸+顺