脐带间质干细胞来源的囊泡预防顺铂诱导肾毒性的实验研究

《脐带间质干细胞来源的囊泡预防顺铂诱导肾毒性的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、@江．藩大擎硕士学位论文MASTER'SDISSERTATION分类号墅三L!密级公珏UDC亟12编号!Q2窆窆SlQ!垒Q2墨㈩IlllIII11[IIll[IIIIl硕士学位论文Y2294312脐带间质干细胞来源的囊泡预防顺铂诱导肾毒性的实验研究INVESTIGATIoNOFMECHANISMOFEXOSOMESDERTVEDFRoMHIIMANUMBII。ICAI．CoRDMESENCH删ALSTEMCELLSPREVENTCISPLATIN．INDUCEDNEPHRoToⅪCITY作者姓名：王冰

2、莹指导教师：钱晖教授小组成员：许文荣教授朱伟研究员申请学位：硕士学科专业：临床检验诊断学论文提交日期：2013年4月26日论文答辩日期：2013年6月10日学位授予单位：江苏大学学位授予日期：2013年6月答辩委员会主席：张竹繁教授评阅人：基金资助：国家自然科学基金项目(81200312，81272481)=江苏省科技支撑计划(BE2010703)；江苏省医学领军人才与创新团队(LJ201117)；江苏省自然科学基金青年基金项目(BK2012288)；独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导

3、师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：习水芍日期：钞I；年多月／石日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏大学可以将本学位论文的全部内容或部分内容编入有关数据库

4、进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密囡。学位论文作者签名：习藤瓤指导教师签名：名建旷矽l弓年5月／，6日．．硼弓年6月／占日江苏大学硕士学位论文摘要目的评价人脐带间质干细胞来源的囊泡(humanumbilicalcordmesenchymalstemcellderivedexosomes，hucMSC-Ex)对顺铂(Cisplatin，Cisp)。肾毒性的预防效果并探讨自噬在其中发挥的作用，阐明hucMSC．Ex预防顺铂肾

5、毒性的相关分子机制。方法通过流式细胞术、成骨和成脂诱导实验鉴定体外分离培养的人脐带间质干细胞(hucMSC)。收集无血清培养的hucMSC和人成纤维细胞(HFLl)的上清，超速离心法分离纯化两种细胞来源的囊泡，透射电镜和免疫印迹法检测其形态及生物标记：构建体外hucMSC．Ex预防顺铂诱导的大鼠肾小管上皮细胞株(NRK．52E)急性损伤模型(7组)：Control，NRK一52E细胞无Cisplatin处理；Cisp+PBS，NRK．52E细胞与Cisplatin共培养；Cisp+hucMSC．Ex，顺

6、铂处理前O．5h加入hucMSC．Ex：Cisp+hucMSC．Ex+3MA，顺铂处理前lh加入自噬抑制剂3．甲基嘌呤(3一methyladenine，3MA)，O．5h后再加hucMSC—Ex：Cisp+3MA，顺铂处理前lh加入3MA；Cisp+Rapa，顺铂处理前lh加入自噬促进剂雷帕霉素(rapamycin，Rapa)：Cisp+HFLl-Ex，顺铂处理前O．5h加入HFLl-Ex；顺铂加入8h后收集细胞及培养上清。通过透射电镜、qRT-PCR、TUNEL、线粒体膜电位、免疫荧光、免疫组织化学、

7、免疫印迹法及酶联免疫法等技术检测自噬、凋亡和炎症相关指标：构建体内hucMSC．Ex预防顺铂肾毒性模型：SD大鼠腹腔注射顺铂前，经’肾被膜输注PBS或hucMSC．Ex或3MA或Rapa或HFLl．Ex。在注射顺铂前(0d)以及注射后的不同时间点采血，脐带间质干细胞来源的囊泡预防顺铂肾毒性的实验研究注射3d后处死大鼠留取肾组织。测定血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)和肾组织HE染色评价肾损伤程度，免疫印迹法、免疫组织化学及液相蛋白芯片等检测自噬、凋亡及炎症相关分子的变化。结果成功分离纯化hucMSC，其

8、表面标记蛋白CD34、CD45和HLA．DR表达阴性，而CDl3、CD29、CD44、CD90、CDl05和HLA一1表达阳性。电镜下分离的hucMSC—Ex呈圆形，表达囊泡相关标记CD81、CD9和CD63。体外实验hucMSC—Ex能抑制顺铂诱导的NRK一52E细胞膜电位降低和TUNEL阳性细胞数增多，增强细胞增殖蛋白PCNA、抗凋亡蛋白BCL-XL和BCL-2的表达，抑制凋亡蛋白Bax、Cyt-c、Caspase3和细胞炎症因子TNF