人脐带间质干细胞来源的exosomes修复肝纤维化的实验研究

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1、江苏大学硕士学位论文人脐带间质干细胞来源的exosomes修复肝纤维化的实验研究姓名：李婷芬申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：钱晖20120608江苏大学硕士学位论文摘要目的在人脐带间质干细胞(humanumbilicalcordmesenchymalstemcells，hucMSCs)修复小鼠急慢性肝脏损伤研究的基础上，探讨hucMSCs来源的囊泡(exosomes)对四氯化碳(carbontetrachloride，CCl4)诱导的小鼠肝脏纤维化的修复效果及机制。可为临床hucMSCs来源的exosomes(hucMSC．Ex

2、)治疗肝脏纤维化提供实验依据和新思路。方法体内研究建立CCh诱导的小鼠肝脏纤维化模型，实验组在损伤6W肝脏定点注射hucMSC-Ex，以注射PBS组为对照。不同时间点收集小鼠血清和肝脏组织，通过化学发光法检测血清中透明质酸(HA)含量，ELISA法检测血清中转化生长因子一131(TGF-131)的含量。通过病理HE染色、免疫组化、RT-PCR和Westernblot等技术检测肝脏组织中胶原和TGF．131／Smad信号通路有关指标的表达变化，综合评价体内实验中hucMSC．Ex对小鼠肝脏纤维化的修复效果及可能机制。体外研究采用人重组TGF．13

3、1诱导人肝细胞系HL7702细胞，再加入hucMSC-Ex作用72小时，观察hucMSC-Ex作用前后细胞形态学变化，通过RT．PCR和Westernblot技术检测作用前后上皮．间质转化(epithelial-to-mesenchymetransition，EMT)相关的基因和蛋白表达的变化。人脐带间质干细胞来源的exosomes修复肝纤维化的实验研究结果成功建立CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型，体内血清学和肝组织病理学分析显示hucMSC．Ex移植改善了CCl4诱导的肝脏纤维化损伤。HucMSC-Ex移植降低了l型和3型胶原(collage

4、nI和collagenIII)基因的表达，减少了小鼠肝脏中细胞外基质(ECM)的沉积；RT-PCR和Western-blot结果也显示hucMSC-Ex移植到小鼠肝脏后也减低了TGF一131的表达，进而抑制了TGF-131／Smad信号通路中Smad2分子的激活；免疫组化结果发现对照组(PBS组)小鼠的肝细胞发生EMT，上皮化指标E．钙粘附蛋白(E．cadherin)阳性细胞百分比明显减少，间质化指标N．钙粘附蛋白(N．cadherin)和波形蛋白(Vimentin)阳性细胞百分比显著增加。HucMSC-Ex移植后小鼠肝组织中E-cadheri

5、n阳性细胞百分比显著提高，而N．cadherin和Vimentin阳性细胞百分比显著减低；进一步通过免疫组化和Western-blot技术显示hucMSC-Ex移植组的肝组织中肝星状细胞分泌的Q．平滑肌肌动蛋白(0【．SMA)和成纤维细胞激活蛋白0【(FAP．a)较PBS组表达含量显著减少。体外研究显示，人类重组TGF—Bl因子(2ng／m1)诱导人肝细胞系HL7702细胞3天，观察到HL7702细胞形态由六边形转变为纺锤形，两极拉长似成纤维细胞，同时RT-PCR和Western．blot检测发现诱导后HL7702细胞中的EMT的间质化指标N．

6、cadherin，Vimentin，Twist表达升高，上皮化指标E-eadherin表达下降。实验组加入hucMSC-Ex作用后，HL7702细胞的纺锤形发生逆转，间质化指标N．cadherin，Vimentin，Twist表达下降而上皮化指标E．cadherin表达显著升高。n江苏大学硕士学位论文结论HucMSC．Ex通过抑制胶原的生成修复CCl4诱导的小鼠肝脏的纤维化，体外hucMSC-Ex逆转了TGF．p1诱导肝细胞发生的EMT，从而发挥了肝脏保护功能。这为hucMSC-Ex为临床治疗肝纤维化提供了实验依据，开拓了新思路和新方案。关键词

7、脐带间质干细胞，囊泡，四氯化碳，肝纤维化，转化生长因子pl，上皮一间质转化111江苏大学硕士学位论文ABS眦CTAims：Humanumbilicalcordmesenchymalstemcells(hucMSCs)havebeenconsideredasallattractivetoolforthetherapyofliverdiseases．Onthisbasis，weaimedtoinvestigatetheeffectsofexosomesderivedfi-omhumanumbilicalcordMSCs(hucMSC-Ex)onca

8、rbontetrachloride(CCl4)-inducedhepaticfibrosisanditsmechanism．Thesedatawill