负载her-2多肽的dcik细胞对乳腺癌细胞杀伤作用研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com第40卷第4期分子细胞生物学报Vo1．40．No．42007年8月JournalofMolecularCellBiologyAugust2007负载Her一2多肽的DCIK细胞对乳腺癌细胞杀伤作用研究应学翔邹强”徐永华z．王恩忠王红鹰胡轶红倪泉兴l复旦大学附属华山医院外科，上海200040；z中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所，上海200031)摘要本文观察利用树突状细胞(DC)呈递肿瘤抗原(Her一2多肽)的特性提高DCIK细胞对乳腺癌细胞的杀伤活性提取外周血来

2、源的有核细胞诱导分离出细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)和树突状细胞(DC)。DC负载Her一2多肽后和CIK细胞共培养产生DCIK细胞，并鉴定其HLA基因型。分析三株肿瘤细胞(MDA—MB一231、SK—BR一3、MCF一7)HLA基因型和Her一2蛋白表达情况。用细胞毒试验fCCK一8法测定DCIK细胞的对三株Her2表达不同的乳腺癌细胞株的杀伤活性。结果表明DCIK细胞对MDA—MB一231、SK—BR一3、MCF一7的杀伤率(效靶比10：1)分别为5O，38％±3．25％、52，19％±3，25％、47．O9％±2．41

3、％。而负载Her一2多肽的DCIK细胞对MDA—MB一231、SK—BR一3、MCF1__7的杀伤率分别为76．30％_+1，74％(P<0．001)、55．7O％±3，05％(t~0．0143)、47．67％±240％(=()．6972)。实验证明负载Her一2多肽的DCIK细胞能显著提高对Her一2(+)的乳腺癌细胞的杀伤作用。为乳腺癌患者进行过继免疫治疗提供了理论依据。关键词：DCCIKDCIIKHer-2多肽乳腺癌目前是女性最多见的恶性肿瘤。目前乳原特异性。即提示该体系诱导产生了细胞毒T淋腺癌的治疗方式主要有手术、化疗

4、、放疗、内分泌巴细胞(CytotoxicTLymphocyte，CTL)。本研究采用治疗和生物靶向治疗等，而其中的生物靶向治疗细胞毒实验检测负载了Her一2多肽的DCIK对不以其高特异性和低毒性越来越受到临床的重视。同乳腺癌细胞株的杀伤率。同时通过检测效应细树突状细胞(Dendriticcell，DC)是一大类重要胞(DCIK细胞)和靶细胞(乳腺癌细胞)的HLA基的抗原提呈细胞(APC)，参与T细胞介导的免疫应因型和Her一2蛋白的表达，来分析DCIK和DCIK—答[。细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine—inducedP

5、细胞的特异性杀伤作用。killer。CIK)是以T细胞为主要成分的异质细胞群，1材料与方法其主要效应细胞为NKT细胞(CD3CD56细胞)。NKT细胞兼有强大的抗瘤活性与NK细胞和T细1．1细胞系胞的表型特征，其细胞毒性大于NK细胞，其体外乳腺癌细胞MDA—MB一231、SK—BR一3购自上增殖活性更明显高于NK细胞，因而越来越被肿海生物化学和细胞生物学所细胞库，乳腺癌细胞瘤临床所关注[。DC与CIK细胞共培养产物称为MCF一7为本实验室所有；DC、CIK细胞由本实验室DCIK细胞，即DC调节的细胞因子诱导的杀伤细制备，血液购

6、自上海市血液中心。胞(DC—modulatedandCytokine—inducedKiller1．2主要试剂Cens，简称DCIK细胞)．5]，其细胞毒活性和增殖基因重组白介素4(rhlL一4，比活力13U／ng)基活性均比CIK细胞进一步增强[z-，更是成了研究因、重组粒巨噬细胞集落刺激因子(rhGM—CSF)购的热点。近年来的研究[s]发现，由负载抗原肽后的DC本文2007年3月16日收到。2007年5月20日接受。与CIK组成的共培养系统(CIK—DC共培养系统，上海市卫生局2005—67号科研课题。称为DCIK—P细

7、胞)，对表达相关抗原的肿瘤细胞”通讯作者，Tel：021-62489999"4355，Email：zouqiang003@ya—具有更强的杀伤活性．提示这种杀伤作用存在抗hoo．corn．ca；Tel：021—54921361，E-mail：yhxu@sibs．ac．ca维普资讯http://www.cqvip.com194应学翔邹强徐永华王恩忠王红鹰胡轶红倪泉兴40卷自厦门特宝生物工程股份公司；鼠抗人CD3单克离心去上清后，细胞计数，配成浓度为5x105／ml，隆抗体(CD3McAb)购自加拿大YES生物技术公l×106／m

8、l细胞悬液。以100td／每孔加入到96孔板司：IFN'~购自上海生物制品所；PE一抗CD1单抗、中，37~C、5％CO2孵育4h。空白孔以200pJ的培养FITC—CD40、FITC—CD80等单克隆抗体及其同型对液代替：每孔加入CCK一8各20pJ，继续孵育2h，每照抗体