her-2致敏的dcik细胞对难治性乳腺癌细胞免疫治疗的实验研究

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1、复旦大学博士学位论文Her--2致敏的DCIK细胞对难治性乳腺癌细胞免疫治疗的实验研究姓名：许悦申请学位级别：博士专业：外科学指导教师：邹强2012-04复旦大学博士论文中文摘要目的：1．建立能诱导生成CTL的Her2多肽负载的ClK-DC共培养体系(即DCIK-P细胞)2．比较DCIK、DCIK．P细胞、表阿霉素、赫赛汀对乳腺癌细胞的杀伤作用3．比较DCIK、DCIK-P细胞对Her-2阳性乳腺癌细胞和Her-2阴性乳腺癌细胞的杀伤作用4．探讨DCIK．P细胞特异性杀伤作用的可能机制方法：1．利用细胞生物学技

2、术体外培养DCIK和DCIK．P细胞。2．流式细胞技术分析DCIK和DCIK-P细胞的表型以及RT-PCR分析细胞的基因型。3．CCK-8法检测DCIK、DCIK．P细胞、表阿霉素、赫赛汀对乳腺癌细胞(SK．BR-3、MCF．7)的杀伤作用。4．采用Si．RNA干扰技术以及基因转染技术调节SK．BR-3、MCF．7细胞的Her-2表达情况，再次用CCK-8法检测DCIK-P细胞对调节后的乳腺癌细胞杀伤作用。结果：1．建立了DCIK．P共培养体系，流式细胞仪分析提示DCIK细胞有很高的NKT细胞含量并且加强了向C

3、TL细胞分化的能力。并筛选出实验所需的HLA-A2型细胞；筛选了具有不同特征的两株乳腺癌细胞即SK—BR-3和MCF-7，它们分别为HLA-A2+Her2+、}玎二A-A2+Her2。；，2．DCIK细胞、DCIK-P细胞、表阿霉素、赫赛汀对乳腺癌细胞的杀伤作用负载Her2的DCIK-P细胞对于高表达相关抗原的肿瘤细胞的杀伤活性明显高于三个对照组，而对于低表达或不表达相关抗原的肿瘤细胞杀伤活性无明显提高，表明DClK-P细胞对肿瘤细胞具有抗原特异性杀伤作用。3．DCIK．P细胞对Her-2表达不同的乳腺癌细胞杀

4、伤作用可能机制采用SiRNA干扰技术下调SK-BR-3细胞Her-2表达量、同时采用基因转复里大学博士论文染技术上调MCF．7细胞Her-2表达量，再次用CCK-8法检测DCIK-P细胞对调节后的乳腺癌细胞杀伤作用，对两株乳腺癌细胞的杀伤率变化差别都有统计学意义，证明DCIK-P细胞对Her-2表达不同的乳腺癌细胞杀伤作用可能是通过调节Her-2这一靶点达到的。结论：1．和表阿霉素、赫赛汀以及DCIK细胞相比，DCIK．P细胞能明显提高对Her．2阳性乳腺癌细胞的杀伤力。2．DCIK—P细胞对乳腺癌细胞的杀伤作

5、用与细胞表达Her-2情况有关。3．DCIK．P细胞对Her-2表达不同的乳腺癌细胞的特异性杀伤作用机制可能是通过调节Her-2靶点达到的。关键词：乳腺癌：树突状细胞；CIK细胞；DCIK细胞；DCIK．P细胞：表阿霉素；赫赛汀；Her-2阳性乳腺癌细胞；Her-2阴性乳腺癌细胞；基因干扰；中图分类号：复旦大学博士论文ThestudyofthecellularimmunetherapyofHer-2pulsedDCIKsagainstintractableBreastcancercellsAbstractobi

6、ective：1．toestablishCIK-DCCO—culturesystemwithHer2-pulsedantigenpeptideofDC，induceHer2-specificCTLandprovideatechnicaldataforthedevelopmentofbreasttumorvaccineusingHer2．2．TostudythekilleractivityofDCIKs—P、DCIKs、epirubicinandhereeptinagainstdifferentbreastcan

7、cercellslines．3．TostudythekillereffectofDCIKs-PonHer-2positiveBCcellsandHer-2negativeBCcells．4．ToresearchthepossiblemechanismoftheDCIKs—P’Skillingspecificity．Metllods：1．CIKandDCwerefirstinducedandisolatedfromhumanperipheralblood；CIKandDCpulsedwithantigenHer2

8、werethenco-culturedtoprepareCIK-DCCO—culturesystem(DCIK—P)．2．ByRT-PCRandWestern·Blot,theisoformsofDCIKsandBCcellswereidentified．3．theantigen··specicficcytotoxicityofDCIK--PagainstdifferentBCcell