氟非尼酮抗炎作用机制研究

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1、中图分类号—世UDC610博士学位论文学校代码!Q5三3密级公珏氟非尼酮抗炎作用机制研究Studyonanti-inflammatorymechanismoffluorofenidone作者姓名：黄玲学科专业：临床医学研究方向：内科学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：陶立坚教授论文答辩日期呈Q堡奎鱼虫至同答辩委员会主中南大学二O一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的

2、同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：—塑学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：垄煎导师签名‘2△!1日期：211圣年』月土日作者签名：垄煎导师签名i△：!日期：211圣年』月土日博士学位论文中文摘要摘要氟非尼酮抗炎作用机制研究第一章氟非尼酮对肾小

3、管上皮细胞炎症反应的影响及作用机制研究研究背景：肾纤维化是各种慢性肾脏疾病进展至终末期肾病的共同通路和主要病理基础。无论何种病因导致的慢性肾脏疾病，随着慢性肾脏疾病的进展往往会导致广泛的组织纤维化、肾实质完全破坏和肾功能衰竭。因此，攻克肾脏纤维化一直是慢性肾衰竭防治中最为关键的科学问题。抗肾纤维化新药AKF．PD是本课题组设计的小分子化合物。目前已证实AKF．PD对肾纤维化实验动物模型有良好的抗纤维化疗效。但AKF．PD治疗肾间质纤维化的具体机制尚未完全阐明。目前的研究结果显示AKF．PD能抑制NADPH氧化酶的表达和减少活性氧的产生，抑制肾小管细胞凋亡、转分化及成纤维细胞的增殖，下调致

4、纤维化细胞因子的表达，减少病变肾脏基质胶原合成。研究表明炎症反应是肾脏纤维化发病进程中的早期事件，对肾纤维化的发病具有重要作用。但AKF．PD对肾脏局部细胞炎症反应的影响及其作用机制尚不清楚。肾纤维化是个复杂的病理生理过程，需要多种细胞的参与及相互作用，包括肾固有细胞及募集的炎症细胞。肾脏受到多种致肾损伤因子作用后，一方面非致死受损的肾固有细胞本身发生活化、增殖，分泌大量炎症／趋化因子，加重肾损伤；另一方面致死性受损的肾固有细胞发生坏死、凋亡，细胞死亡后作为抗原激活临近炎症细胞，II博士学位论文中文摘要促进炎性细胞分泌炎症因子／趋化因子，扩大炎症反应，进一步加重肾损伤。肾小管上皮细胞是兼

5、有免疫调节作用且生物学功能十分活跃的细胞。作为肾固有细胞的主要组成部分，其在肾脏疾病局部微环境形成及调控中发挥重要作用。研究报道促炎因子TNF．Q在肾间质纤维化中表达增加，增加的TNF．Q可以加重炎症反应及肾损伤。目的：观察AKF．PD对促炎因子TNF．0【诱导HK-2细胞炎症因子及趋化因子表达的影响；进一步探讨AKF．PD对TNF．a诱导HK．2细胞MAPK及NF．vd3信号通路的调节作用。方法：将细胞分为空白对照组，TNF．Q刺激组，TNF．a+AKF．PD组，TNF．0【+DEX组，分别用2mMAKF．PD、1uMDEX预处理HK一2细胞1小时后，加入TNF．a(10ng／m1)继

6、续培养24小时，收细胞上清，用ELISA方法观察AKF．PD对TNF．伐刺激的HK．2细胞IL．6、IL．8及MCP．1的影响。将细胞分为空白对照组，TNF．仅刺激组，TNF．a+AKF．PD组，TNF．a+MAPKs抑制剂组，分别用2mMAKF．PD预处理HK-2细胞24小时，10山MAPKs特异性抑制剂(PD98058、SB203580、SP600125)处理HK-2细胞1小时后，加入10ng／mln师．a继续培养15分钟，提细胞蛋白，用WesternBlot方法检测AKF．PD对p-ERKl／2，p-p38和p-JNK表达的影响。将细胞分为空白对照组，TNF．0【刺激组，TNF．a

7、+AKF．PD组，TNF．a椰’．v．B抑制剂组，分别用2mMAKF．PD预处理HK．2细胞24III博士学位论文中文摘要小时，101xMNF．r．B特异性抑制剂BAYl1．7082处理HK-2细胞1小时后，加入10ng／mlTNF．0【继续培养60分钟，提细胞蛋白，用WesternBlot方法检测AKF．PD对细胞内p-Ir．Ba表达的影响。将细胞分为空白对照组，TNF．IX刺激组，TNF．IX+AKF．PD组，用2mMAKF-P