银花泌炎灵片抗炎作用及其机制研究

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1、银花泌炎灵片抗炎作用及其机制研究ResearchontheAnti-inflammatoryEffectsandPreliminaryMechanismoftheYinhuaMiyanlingTablet作者姓名：赛景影专业名称：微生物学指导教师：王放教授学位类别：理学硕士答辩日期：2015年5月20日中文摘要银花泌炎灵片抗炎作用及其机制研究银花泌炎灵片为采用现代工艺精制而成的中成药制剂，其组方由金银花、半枝莲、萹蓄等十味中药材组成，是治疗泌尿系统感染的临床常用药物，现已成为泌尿系统感染治疗的首选中药之一。以往研究认为该药具

2、有抗菌、清热解毒、通淋利尿、补肾固本，活血化瘀、提高机体免疫力等作用。本研究组应用现代药理学研究技术发现银花泌炎灵片具有抑制大肠埃希菌生长的作用，对大肠埃希菌标准菌株ATCC25922和产ESBLs大肠埃希菌的MBC50-90分别为100mg/mL和150-250mg/mL,但其是否具有抗炎作用及抗炎机制尚不清楚。本研究从细胞学水平证明银花泌炎灵片具有抗炎作用，并应用炎症因子芯片初步探讨了其抗炎机制，为了该药的进一步临床应用及推广提供实验和理论依据。实验方法：1.药物抗炎活性研究：采用Ficoll密度梯度离心法分离健康人外周

3、血单个核细胞（Peripheralbloodmononuclearcell,PBMC），以无菌的脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）刺激PBMC，建立炎症模型。实验分组：正常对照组（给予无菌细胞培养液），模型组（LPS炎症模型组），药物治疗组（造模后给药组）。造模后，以正常对照组作为对照，应用四甲基偶氮唑盐（Fourmethylthiazolyltetrazoliumsalt,MTT）法测定药物治疗组的细胞毒性。为确认药物治疗组细胞在药物作用前后的数量未发生明显变化，先以台盼蓝法计数药物作用前及作用后活细

4、胞率，再以（Enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）法检测各组细胞培养液中炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IIL-6、IL-10、MCP-1的蛋白表达水平。2.药物抗炎机制研究：以2TMPAHS-097ZA-2RTProfilerPCRArrayHumaninflammasomes炎症因子芯片法高通量筛选药物的炎症因子作用靶点及相关通路，应用MatLab聚类分析技术和KEGG数据库等方法对筛选结果进行分析。实验结果：银花泌炎灵片对PBMC的半数抑制浓度（halfmaximalinhib

5、itoryconcentration，IC50）为4.05mg/mL；药物作用前后各组细胞存活率均>95%；药物治疗组和模型组相比较，TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10和MCP-1显著降低（P＜0.01）。HumaninflammasomesPCRArray芯片结果显示：药物治疗组与模型组相比较，15个基因出现差异表达（表达倍数>2.0）；Pathway分析结果显示：出现差异表达的15个基因主要关联在NOD样受体和Toll样受体（NOD-likereceptor和Toll-likereceptor）pathway上

6、。结论：银花泌炎灵通过降低IL-1β和IL-18等炎症因子的分泌而发挥抗炎作用，其机制主要是该药物影响了NOD样受体和Toll样受体Pathway中的炎症相关基因NLRP3、NLRP1以及caspase-1等的表达,从而抑制了下游的炎症反应。关键词：银花泌炎灵片；炎症反应；固有免疫；PBMC；炎症因子；NLRP3IIAbstractResearchontheAnti-inflammatoryEffectsandPreliminaryMechanismoftheYinhuamiyanlingTabletYinhuanmiyan

7、lingTabletsisoneofproprietaryChinesemedicinewhichcomposedbyhoneysuckle,Scutellariabarbata,knotgrassandotheringredients,istheclinicalcommonlyuseddrugsforthetreatmentofurinarysysteminfections,ithasbecomeoneofthepreferredChinesemedicineforthetreatmentofurinarytractinf

8、ections.Previousstudiessuggestthatthemedicinehasthefunctionsofanti-bacteria,detoxification,leachingdiuresis,kidneyfoundation,andbloodcirculation,